求助ips复苏的问题

nichifanlema2

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1. 冻存的干细胞状态对于复苏效率有较大影响。( ~3 j& _. B1 `9 n
2. 37度快速复苏、稀释冻存液和离心过程严格操作，不要吹打过于剧烈。
3 `3 Y5 l* r+ I: K7 x( ]6 c, s3. 复苏后为提高效率，可以加入Y27632。
0 y+ q4 ]) i  K1 o8 P, h4. 常规培养用可以细胞团块的形式冻存和传代。( c3 u6 Q: X1 K' b
5. 克隆生长缓慢或者不生长，可能是饲养层太密了，也可能是培养基已经不支持生长了，可以降低饲养层密度或者每天更换培养基。

nichifanlema2

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3 o  o* S, P, `8 `. n: Q2 b( L/ x2 |& G, b2 s& h
细胞吹打过度会加重细胞死亡，稀释冻存液时要缓慢滴加，一般4-10倍体积稀释没有问题，但是5倍以上稀释可能没有太大的必要，因为一方面浪费培养基，另一方面离心不太容易。可以1000-1500rpm离心5min，或者200g离心5min。

nichifanlema2

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* g1 X( `* e% u! a) V/ T2 W! j常用的就是Y27632,。关于feeder密度，T25培养瓶可以复苏50-80万feeder。

nichifanlema2

回复 冬天的雪糕 的帖子$ R& S5 q4 t. |: ?: _+ W9 k

2 O$ p" S; L( F4 F- a用DMSO溶解，配成母液，用的时候加入培养基中，终浓度为10uM即可。