求助ips复苏的问题

watchen198891

楼主可以简单说一下你复苏的方式不？同意楼上的说法，还有其它的方面的问题，细胞冻存的方式，复苏的方式，冻存液的配置，复苏时离心的转速以及复苏时细胞打散的方式，太多方面的问题。还有就是你MEF本身的问题，MEF数量以及状态等。

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我也没有加y27632，细胞可以吹散，但是只能轻微吹打，不能反复吹打，有的时候我基本不吹打，手指弹几下，沉淀飘起来就直接加入培养皿中了。离心的话就800rpm，3min。培养基更换一般第一天观察一下，如果液体变黄或者克隆长出较多则换液。我是这样做的，细胞状态还可以。

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$ x0 B2 t) r. i9 m7 bMEF更换是什么意思？是说你铺好没有用可以放多久吗？还是你准备传代的时间？iPS传代时间一般跟你克隆大小确定，当然如果养得比较好的话基本两天就会传代。

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* z& q2 ?( N- T! f) c* y这个到不是很清楚，一般来说ips克隆足够大了就直接传代或者冻存，至于MEF能够支撑多久我没有注意，ips克隆到一定程度很容易出现分化。我觉得MEF不能够长期支持ips生长，要是你的ips长时间不能够形成克隆状态，那你的细胞应该要检查一下。

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0 [" U* h+ C8 ~& C( s) P血清加10%的DMSO或者培养基加30%血清再加10%DMSO。我这样用的，效果还行。血清太贵，后面就改用培养基来代替。复苏的时候没有多大的问题。