求助ips复苏的问题

nichifanlema2

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1. 冻存的干细胞状态对于复苏效率有较大影响。
# U5 Z; [# c( }9 ]: P2. 37度快速复苏、稀释冻存液和离心过程严格操作，不要吹打过于剧烈。
4 ^9 t& v5 Z8 [  A3. 复苏后为提高效率，可以加入Y27632。
: s0 `; ]3 S) I# q( z% t4. 常规培养用可以细胞团块的形式冻存和传代。
& t1 X1 T& ^- [! h5. 克隆生长缓慢或者不生长，可能是饲养层太密了，也可能是培养基已经不支持生长了，可以降低饲养层密度或者每天更换培养基。

nichifanlema2

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% p+ d" y5 |/ l  @细胞吹打过度会加重细胞死亡，稀释冻存液时要缓慢滴加，一般4-10倍体积稀释没有问题，但是5倍以上稀释可能没有太大的必要，因为一方面浪费培养基，另一方面离心不太容易。可以1000-1500rpm离心5min，或者200g离心5min。

nichifanlema2

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常用的就是Y27632,。关于feeder密度，T25培养瓶可以复苏50-80万feeder。

nichifanlema2

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9 z" y) T- s1 h: O$ b
用DMSO溶解，配成母液，用的时候加入培养基中，终浓度为10uM即可。