贴壁培养的胚胎干细胞该如何消化成单细胞悬液？ - 胚胎干细胞专区干细胞之家

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元杰5

新手上路

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楼主

发表于 2015-7-14 11:03 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

如题，内胚层分化倾向的ESC，贴壁法培养，细胞都是呈克隆团状，做流式需要将其消化成单细胞悬液，但消化时有很多贴壁细胞消化不下来，只能大量吹打，结果出来的流式图有大量杂信号，求合适的消化方法……

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金话筒优秀会员帅哥研究员

沙发

发表于 2015-7-14 12:12 |只看该作者

有种ESC消化成为单细胞的消化液Accutase，就可以把ESC消化成为单细胞。

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千细胞

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藤椅

发表于 2015-7-14 16:48 |只看该作者

这个要看你是什么样的培养体系，如果是在无饲养层的培养体系下，如楼上所说可以选用Accutase，很容易消化成单细胞的。如果是在有饲养层的培养体系下，可以先用Dispase消化液在37°C处理一段时间，ESC克隆会周边卷起并与饲养层细胞分离，这时候去除Diapase就可以将整个克隆消化下来，再选用Accutase或者其他的酶将它们消化成单细胞就可以了。