淋巴细胞分离液使用

老姜

我们是750g

121qwq

回复 老姜 的帖子4 b  A( T7 i8 w

: S6 r! B: l4 n非常正确，因为Ficol液的密度是不一样的，所以必须稀释之后细胞才能离下来，吸过多是不行的，红细胞吸多了也很头痛，我不知道怎么处理好

老姜

1 我们实验中遇到吸MNC层时吸得Ficoll层太多，加入生理盐水后离心，MNC离不下来，将这部分细胞又再分为两份，再补入生理盐水（实质是将Ficoll稀释）后细胞才离下来。所以，不主张多吸Ficoll层的细胞。# Z- j5 c0 f0 s6 `' M
2 吸入Ficoll层过多的红细胞，若是进行培养，红细胞几天后即死亡，如果是培养要求换液还好，如果只是添液死亡红细胞的“废物”怎么处理？对细胞生长多少都会有些影响的。
) U/ f8 F, Q0 s# Z  Z% l( S9 I3 淋巴细胞分离液中的泛影葡胺等成分对细胞的生长有影响，所以，一般经Ficoll分离的细胞后均要洗涤三遍。

nkcell

淋巴分离液的品牌不同，离心力就不同，国产的一般400G就可以了，进口的最少500G

121qwq

回复 nkcell 的帖子2 ]) a2 V7 k9 S' Y2 H1 i. }

7 @7 f9 D4 ?8 c& e3 \是使用多少g的离心力比较好呢？我们用的是600g

nkcell

1.尽量多吸白膜层，如果吸了淋巴分离液过多的话，在离心的过程中会损失一部分细胞
7 |. k, e; m* p, I  ^2.白膜层的细胞如果在淋巴分离液中比较多，就是离心的转数不合适，要尽快调整

teahouse0802

1.尽量不要多吸白膜层上下的液体，尤其不要吸太多的细胞分离液，因为细胞分离液的密度本身就比单个核细胞略小，如果细胞分离液的含量过多，不利于全部单个核细胞的洗脱。# m& P; ?/ J- k4 z6 a1 a( E
2.如果要想保证单个核细胞全部分离出来，想要吸取白膜层上下的液体，请尽量多分几个离心管，吸取的液体与新加的生理盐水比例最好不要超过1：1.: Y# v% i& v; a9 u

eeel

白膜层内含有一定量的单个核细胞，做科研的话尽量只吸取白膜层，做临床可以上下层多吸，保证病人细胞能够尽可能的多回收。对后期培养基本没什么影响。

gondobar

当然是只取白膜层，但是手法限制，所以会吸到其他分离液。如果上层吸的过多会导致血小板过多，下层可能导致血细胞吸入。血小板大部分会洗掉，其余2~3天消失。基本不影响培养。

colins

我们吸取上下0.5厘米，虽然没什么影响，但是还是越少越好