请教取人皮肤制备成纤维细胞

zxmflying

我们想做人iPSCs，请问怎么取人皮肤制备成纤维细胞？希望有经验的童鞋分享一下比较详细的protocol，谢谢！听说现在有专门的皮肤取样器。

wuxiao101325

一般来说，没人会愿意捐献，据说皮肤取样器会很痛并且取完后会影响美观。建议：跟医院合作取包皮环切术后的包皮，那玩意一没人要，二可以培养出足够你用的细胞。

watchen198891

二楼，这东西能够搞到？我需要人的皮肤建成纤维系。

zxmflying

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+ b, \3 U; @  o9 L/ a6 O8 V* ]: a- @: G  Y" f1 A) Z5 K
谢谢回复！我们想找一种做iPSCs比较易得、有效的原始来源细胞。对比了一下，取尿液细胞虽然无创，但是得到的尿液上皮细胞多数情况下都已衰老，不利于重编程；取头发毛囊，耗时、培养成功率不高；抽血，重编程效率相对稍低。因此觉得还是用成纤维细胞做iPSCs的来源细胞，重编程还是比较理想，所以想咨询一下大家是否有取人皮肤的好Protocol。

wuxiao101325

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9 V5 }$ t1 n5 C6 |- A$ m如果有关系的话不难搞到，没关系也可以去谈合作，比如发文章带署名什么的，个人觉得走公家途径还是麻烦，不如给点辛苦费什么的比较容易，不过建系的话需要什么知情同意书之类的东西吧，国内可能不需要，国外发文章就需要了
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wuxiao101325

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0 f) J6 I% E" T7 O* a$ Q& j
4 |+ ^& H! W# a5 [; U0 a  V, \不知道你们是哪种重编程平台？病毒体系还是质粒体系？如果都还没建好诱导平台的话不如直接考虑建立质粒体系，那样的话就可以直接诱导外周血单个核细胞重编程为iPSCs了，外周血单个核那是相当易得和有效的原始来源细胞，取之不尽用之不竭，取样的创伤也小，几十到几毫升的外周血就够了。

zxmflying

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; ?; N: y- a; f. _# n! [7 w( [7 s+ Q. ?6 i; }/ D
谢谢建议！请问你们也在用质粒体系做iPSCs吗？

wuxiao101325

回复 zxmflying 的帖子2 I3 d8 X/ M8 ]0 }3 b6 y$ R

2 A+ a! l, y* N8 Q; e' S是的

zxmflying

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" ^0 K. x" ~' g; w9 r
  \7 I3 E9 S8 g# E& V) s3 @0 x请问用的是哪一套质粒？效率如何？谢谢！

wuxiao101325

回复 zxmflying 的帖子/ M, L1 a0 t$ j( |/ @
4 J& p0 Q% @- c+ |! P
我们用的是程临钊的那套质粒体系，效率不到万分之一