流式检测细胞表面标记怎么避开带有gfp的绿色荧光

cyz3057

目前做了带有gfp的质粒转染肿瘤细胞，现在想上流式检测一下转染后的细胞表面标记物的含量，在选择流式抗体的时候应该理论上不能选绿色光的标记，除了这一点，在做对照的时候应该注意什么？是不是要以转染空载质粒的为阴性对照，而不是用亲本细胞。谢谢指导。

ryjacket

用亲本细胞做对照调电压，用带GFP的细胞调补偿，用PE标记的二抗检测你的膜分子。

ryjacket

你这属于双标了。

cyz3057

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哦 之前做了一次， 用的是亲本细胞（不加流式抗体）做的阴性对照（应该是您说的调的电压），目的蛋白用的就是pe标记的，做流式的老师说直接设个对照组和过表达组（都加的流式抗体）上机测就可以了， 没有见调补偿 ，您可以讲得细一些吗 ？谢谢哦。

cyz3057

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不是双标，单标哦，只是现在在想怎么规避gfp哦

ryjacket

GFP和PE在一起相当于双标了，由于GFP荧光和FITC差不多，其和PE的发射光谱之间有重叠，所以要调补偿，避免GFP的光漏到PE的检测范围内。

刘小白and刘小黑

GFP跟流式FITC用的同一个通道，可以选择与FITC没有补偿的通道进行其他指标检测，这样就不需要调节补偿了。