细胞分离问题

Anne_Yu

做细胞分离的时候，离心机没有设置好升降系数，结果离心完后，血清、细胞、分离液都混在一起了，于是又重新分离了10分钟，出来后隐约可以看到细胞层，直接吸取那层细胞进行培养。想请教一下大家，在做实验的时候有没有遇到这样的情况，还有出现这种情况后应该这样处理比较好？

我是传奇

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无需四度，18-25

riverdtang

如果你加样的时候界面清晰那可能就是离心机升降速的问题了，升降速达不到那么高的要求，样本量又不大的话，用15ml离心管替代50ml离心管效果会好些

zhengjianwei521

楼上说的很对，加PBS重新混合，调好转速重新离心就好了

小云龙

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5 {) _9 j, h  d8 v  v谢谢

小馬

如果不是全部混在一起，混的有部分红细胞，可以再吸取中间层加PBS稀释在分离，实在不行，大招伺候，红细胞裂解液，三四分钟就好了。当然全部混在一起肯定是哪出问题了

momoenn

其实分离的细胞用于培养的话，细胞不纯也没有关系的，吸取白膜层的时候尽量吸取就可以，就按正常操作就行，接种的时候可以适当的把浓度调高一些，因为你杂细胞比较多嘛，第一次补液的时候注意观察细胞状态，不会有啥问题的。
7 H' \1 Y1 N8 M因为你离心的时候已经把平衡打破了，再继续离心的话效果应该不会很好，可以说铺层这一步，你只能离心一次，中间不能有任何差错。有问题再重复离心，不会解决的，因为这不是简单的差速离心，而是密度梯度离心。你可以这样解决：2500r离心10min，目的是得到血细胞回到铺层前的状态，这个转速和时间你可以再行调整，然后用生理盐水稀释，然后铺层。

zmfang555

如果完全混在一起，很有可能是操作过程中哪一步出问题了，如果血清中，白细胞分层中混有一定比例的红细胞，也可能和患者本身有关，如白血病，部分化疗病人，其本身的血常规就不正常，导致血液密度异常，而ficoll分离的密度不变，所以出现分离不好会时有发生，再次分离任然分离不好。

Anne_Yu

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3 U' R+ Q% i. Y" H我们现在用的这个离心机没有那么多档可以调，只有加速和不加速两个档呢！

珊瑚虫

降速不要最大档就行了，如果是九档的话用7档就足够了