在培养箱放置一段时间的细胞培养液变浑浊，二氧化碳培养箱的清洁与消毒

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最近养的细胞，传代后几天观察状态很正常，融合度达到百分之八十就传代，也都没有出现问题，实验结束就将细胞放在培养箱里，瓶子不做任何处理和移动，过了十天半月左右就发现培养液混浊，镜下观察有细菌，请问这是怎么回事？之前从分离到传代观察都没有问题，水盆的水也都是每周更换并添加杀菌剂，水盆的水进行细菌检测也都是阴性

tingting2113

首先注意一下，在你培养传代的过程中有没有细菌，也就是有可能没有表现出培养液浑浊，但是已经染菌了。那样的话，可能是你这批细胞本身被污染或者培养过程中所用的培养液、PBS等，或是操作过程中污染。“水盆的水进行细菌检测也都是阴性”说明培养箱用水和水盆位置没有问题，但是并不能说明培养箱内部都没有问题，是不是瓶子所在的那层被污染啦，或是之前污染过没有处理干净？建议对培养箱进行彻底处理，保证不是培养箱的问题，再验证一下所用的培养液，培养瓶等。

swtarron

除了培养箱的问题也有可能是传代操作过程中出现污染，只是染菌量特别小，并没有出现培养液变浑浊等肉眼可以观察出来的现象，过了一段时间之后，细菌繁殖才出现你描述的情况。污染任何一个环节都可能是原因，要仔细分析，认真查找原因，排除一切可能污染的因素，避免下一批次的细胞被污染。

woshibotao_01

有些菌有时不太活跃，说白了跟潜伏一样，量很小，肉眼不易观察，但是过一段时间，可能会繁殖起来，量一大自然培养液PH改变，液变浑浊。培养箱是应该定期清理，但是更重要的还是实验中各个环节都要注意无菌，还有就是标本在采集过程中也应尽量无菌。

pcljsw2008

可能是之前放进去就染菌了，我之前遇到一次大污染，前三天看啥反应没有，第四天开始里面开始变浑浊，能看到细菌，很奇怪，至今就遇到那一次潜伏期的

309208770

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培养箱我定期就会用酒精棉擦一下，是不是我的清洁方法不对啊？请问有效的清洁方法是什么？
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月_幻影

污染的发生可能会发生在任何一个环节，不一定是培养箱的原因，有可能是你最后一次传代时不小心带入的，比方说移液管带入等，一开始看不出来是因为细菌的量很少，等它的达到一定数目自然是肉眼可见的污染了，这是需要时间；另外，培养箱的水盘没有污染不一定培养箱里没有污染的地方，建议LZ彻底消毒培养箱，不能只是用酒精擦拭，像真菌、孢子一类的酒精擦拭不管用的、

tingting2113

回复 309208770 的帖子
5 m7 i/ `' x6 L. y7 n' B& x; a, K0 U; f4 j8 J
用酒精擦拭是最常规的清洁方式，你现在已经怀疑是培养箱污染了，可以对培养箱做彻底的清洁。把里面的隔板和水盘什么的都拆下来，用酒精擦拭（包括培养箱内部），然后放到培养箱内部，一般培养箱会自带灭菌，如紫外和湿热等，进行灭菌，如果不放心可以重复。注意的是，做完最好能对co2和温度进行校准。# }) {5 q  d3 Z
你的这次污染的原因可能不是培养箱，可能性很多，逐一排查一下吧9 X* {& s" g; N7 _

edwardellen

培养箱不知要注意水盆，还要定期整体灭菌处理，酒精擦拭或者运行整体高温自灭菌程序。6 [# b8 k3 B7 a9 Y- I' t7 y6 N' z
平时使用的时候，不要太过频繁的开关，不要把整个胳膊都伸进培养箱里，不要在打开的培养向面前说话甚至打喷嚏什么的。
/ ~0 _6 c3 H% A4 W/ h8 |还有就是不要都怀疑培养箱，培养箱里二氧化碳浓度高，培养箱整体污染的还是比较少见的。
% i* Q7 ]+ b5 T" ^# Y( n: ]7 ^( ]发生污染，应该先检查你现在使用的培养试剂，还有就是在做原代分离时用的器材什么的。) w0 t5 O& `! M/ K
很多污染都是因为器材和试剂不干净导致的，比如用的吸头是不是确定无菌，培养液或者PBS什么的是不是被污染了。

309208770

回复 edwardellen 的帖子. ~: }1 u/ l$ z5 E# ]8 T$ L
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好的，我在观察一下，排除一下可能的情况，谢谢您