今天做的茜素红染色，大家看看是不是钙化结节，感觉不大像，我的是MC3T3细胞

sysuhoo

从形态来看，应该是的，特别是21天1那张，染色下面的细胞状态良好，证明确实是钙化的基质，至于染的颜色不如你想要的，我可以告诉你的是，一般钙化比较好的，都有些红中发黑

sysuhoo

回复 梦月寒 的帖子, j5 g/ U! C* j9 K  v$ p8 p

8 I3 v* l3 q* D$ e: Z你用十六烷基吡啶溶解后测OD值就知道了，0.5% 茜素红 pH4.0
' W. Q* D3 M3 O  z# t7 Z8 ^9 F: m氯化十二烷基吡啶 100mM 室温1小时 562nm吸光度值~

sysuhoo

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  ~* B& J# ~) z1 W  u! D
" ]! t/ K1 n# t1 l/ Z钙化结节染色与定量# s. U" N4 w2 x  h6 K8 p
1) 茜素红染色液配制：称取14.41g茜素红溶解于100ml去离子水中，充分搅拌混匀后，将PH调整为4.1，过滤备用。
. |( E4 c* o3 |* N7 a/ E, U2) 十六烷基吡啶溶液配制：称取1g十六烷基吡啶溶解于10ml 的磷酸钠溶液中,混匀后调PH=7.0。
; c/ m: Y/ C1 H! v! i4 V3) 将成骨诱导了21d的细胞样本，PBS轻轻冲洗3遍后，10%多聚甲醛固定1h，再用PBS清洗2遍，茜素红染液染色15min,洗净染色液，相差显微镜照相。钙化结节定量时，将10%十六烷基吡啶溶液加入已染上色的钙化结节样本中15min，收集溶解液，酶标仪检测溶解液的OD值（波长540nm）

sysuhoo

是的，量多少确实没有太大关系，反正只是相对定量，以能全部溶解而不溢出为最好，一般24孔板，200ul-400ul都可以接受。