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看了这么久，学了不少东西，我也贡献一点吧，赚点人气。' W+ U; \; y4 ~3 I) ?6 D
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免疫细胞培养之前采血，一般都用肝素钠抗凝管采血，也有的用枸杞酸钠，但都没有用EDTA抗凝的。
d: j* v V5 x之前没有注意到这样的问题，也不知道EDTA行不行。- P" }. \% q3 `9 P; [7 l; z
后来查找到这样一篇资料，比较三种抗凝剂的影响。
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不同抗凝剂及保存条件对 CIK 细胞培养的影响
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目的：探讨不同的抗凝剂及血液保存时间对细胞因子诱导杀伤（cytokine-induced killer,CIK）细胞的增殖和功能的影响。方法：实验分两个部分，首先检测不同抗凝剂对后续培养的影响，采集健康志愿者外周血，添加 EDTA、肝素钠、枸橼酸纳抗凝，采血后 2 h 内完成操作，CFSE 染色法检测后续培养中细胞的增值能力；第二部分，采用肝素钠抗凝，采血后在室温（约 20 ℃）、4 ℃冰箱中分别放置 0、4、8、24 h 后，进行培养，CFSE 染色法检测后续培养中细胞的增值能力，流式细胞术检测 CIK 细胞中 T 细胞亚群比例、颗粒酶、IFN-γ、穿孔素的分泌情况，以及培养 11 d 细胞对 Hela 细胞的杀伤作用并检测 CIK 细胞的增值、活力和细胞毒作用。结果：EDTA 抗凝时，CIK 细胞扩增数量无明显变化，于第 7 天开始出现迅速下降，并趋向于零；肝素钠抗凝时，CIK 细胞扩增数量在第 5 天开始出现明显上升，于第 11 天达到高峰，细胞数量比起始培养扩增 14.33 倍，之后迅速下降；枸橼酸钠抗凝时，CIK 细胞扩增数量在第 9 天出现明显上升，于 11 d 达到高峰，细胞数量比起始培养扩增 12 倍，之后迅速下降；使用肝素钠抗凝，从实验结果来看，所培养的 CIK 细胞分泌 IL-12 的能力明显增强。相对而言，常温下即刻分离细胞和 4 ℃的条件下保存 4 h组，分泌情况最佳，而 4 ℃的条件下保存 24 h 和室温下保存 8 h，有明显下降。常温下即刻分离细胞和 4 ℃的条件下保存 4 h 组，CD3+CD56+，CD3-CD56+的比例略高于其余各组；而 4 ℃的保存 4 h 条件下培养出来的 CIK 细胞群中，CD4+CD25+细胞比例要略低于其余各组。各组 CIK 细胞均可以表现出一定的杀瘤活性，常温下即刻分离细胞和 4 ℃的条件下保存 4 h 组杀伤能力最强。结论：枸橼酸钠和肝素钠均可以用作CIK 采血的抗凝剂，肝素钠的效果更佳。而使用肝素钠抗凝后，血液标本在常温下 2 h、4 ℃时保存 4 h，不影响后续细胞培养的效果。& K2 Q* s0 j h1 w( k) u
关键词：细胞因子诱导的杀伤细胞；抗凝剂；增殖；细胞毒性 |
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发表于 2015-10-22 11:00
