关于脐带贴壁的问题

蜗牛爱贝贝

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7 a" I  ^4 F" a% ^6 H& Q' y2 \: j( D4 D1 U, y
间充质原代一般不会这么快出来的    有可能不是  

蜗牛爱贝贝

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* Q) @: H* U  B( a, Z, T# N' g+ i2 ~5 A/ a3 v/ l: N! H9 ]) ^
175组织块 建议20ml左右 加上组织块后总体积不要超过25 一般我都是总体积在22左右的  原代培养不要加培养基太多 只有组织块挨到瓶底 才有可能爬出细胞来

zsykdx

组织块铺板后先在酒精灯周围晾晒5min，再加培养基恰好浸没润湿组织块，24h后补液至正常体积，这样做组织块贴附会牢固些，也比较容易爬出细胞

jenny114402

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$ W' k# s. R( S2 `
5 {- ^2 T" n  y! H9 ~! R% q/ F我用的是无血清培养基，在20-25ml，我平时都加25ml

zengping120919

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- a: x: O! o3 V# k. q
7 F* \5 F- B6 a  F4 d) S. c把所有的组织全部剪碎后直接接种的，要不不好贴壁的吧

tlms1991

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- A3 L0 q) o0 N* ?9 A* H9 M
! X6 ?7 k' M& x! p求详细方法。

tlms1991

回复 zengping120919 的帖子9 b9 S( s  `& h* t- W" t

3 A# `0 ^' k3 V3 }2 y非常感谢！

正义的花生

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- ~: F. e& `" `, J) M. q( D- a+ }7 _* x$ h/ t
分离好的组织市剪碎之后就直接种瓶吗？3 H7 Z) U0 `, e0 ?
我现在是把分离好的组织先放在个加了生理盐水的培养皿，全部处理完后加到离心管里离心一下才种的

zsykdx

是不是培养的时间不够？原代培养一般需要7-14天才能爬出细胞，而且在培养过程中不要经常摇晃培养皿。

zengping120919

我们实验室培养感觉挺简单的，没有他们说的那么复杂，脐带从手术室拿出来是放在加了双抗的生理盐水里。处理脐带时，先将整根脐带用PBS溶液洗一遍，然后用75%酒精浸泡大概5分钟，主要是消毒，并且会让脐带表面的羊膜皱起，便于后续处理，在将整根脐带放在PBS溶液中，并将脐带剪成2-3cm的小段。另取一个无菌的玻璃平皿，用来分离脐带，主要是逐段去掉羊膜、动脉和静脉（注意动脉和静脉周围的组织一定要尽量保留，华通胶一定要保留，而且在分离脐带的过程中不能用溶液浸泡分离好的组织），待所有小段都处理好后，将组织剪碎成1mm3的小块，用少量含10%FBS的培养基接种。我们用的是10CM的培养皿，每个皿大概13-15mL培养基。将培养皿放入细胞培养箱中，前三天尽量不要动。如果发现培养基过少，可以适当补液，每个皿大概补2-3mL。除非脐带非常不好，一般一个星期就能长出来，好的话四五天，慢的话不会超过十天。不过我们在培养过程中发现，FBS 真的非常重要，并不是说只要是进口的就一定能长出来，有的批次就是不适合养间充质干细胞。如果你的细胞一段时间内都长不好的话，建议可以换个批次的FBS试试。还有期待尽量选新鲜点饱满的，胶质多的话就更好了。