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标题: 帮忙看看，我的BMSCs怎么了，第五天，附图 [打印本页]

作者: 267318024 时间: 2010-10-20 18:31 标题: 帮忙看看，我的BMSCs怎么了，第五天，附图

大伙帮忙看看，第五天，好像细胞内面有空泡了，谢谢，给点意见！[attach]15474[/attach]

作者: 267318024 时间: 2010-10-20 18:53

大伙帮忙看看吧！！

作者: supergama 时间: 2010-10-20 19:33

细胞自发成脂分化，老了

作者: 267318024 时间: 2010-10-20 19:37

才培养出来就老了，有没有什么更好的方法啊，谢谢了！

作者: daviddow 时间: 2010-10-20 19:53

如果培养条件合适的话，第五天应该生长的很多了。我养的是老鼠的BMSC

作者: mhy1982 时间: 2010-10-20 19:54

像污染了似的呢

作者: 267318024 时间: 2010-10-20 20:05

回复 5# daviddow 5 W1 O5 ]7 E! l
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把你的经验跟我讲讲撒，比方说培养基的浓度，取骨髓的方法等等

作者: luoziwei 时间: 2010-10-20 20:43

像是老化的现象，建议换培养基。

作者: 267318024 时间: 2010-10-20 21:06

对了说说我的方法，含10%胎牛血清的低糖DMEM液（GiBco），方法是全培养贴壁，三天以后第一次换的液，这是第二次换液后的图片！

作者: putongyingwu 时间: 2010-10-20 21:28

这种空泡绝对是老化的表现。其原因很有可能是换液不勤引起的！

作者: daviddow 时间: 2010-10-20 22:29

没有污染，就是这个样子，可能培养基不好，我也建议更换

作者: tanhehe1006 时间: 2010-10-20 22:50

应该就是营养不够的问题，空泡和脂肪化是不一样的，空泡了如果再好好养（补给营养）是可以恢复原来的形态的

作者: 267318024 时间: 2010-10-20 22:50

之前用的事HyClone 的培养基，都没有细胞长出来，现在换成GiBco的了才长成这样了，大伙给点建议，换成什么培养基，我试试！

作者: 267318024 时间: 2010-10-20 22:52

汗了！之前两天换液，结果细胞没有长，这次说等等，三天后第一次换液，结果还是出问题了，真是不好养...............

作者: shiqingxi 时间: 2010-10-21 08:48

如果是刚分的化杂细胞太多了影响MSC的生长建议重新取原代

作者: shiqingxi 时间: 2010-10-21 08:49

明显红细胞很多

作者: 267318024 时间: 2010-10-21 09:01

用的是全培养的方法，上一次取的时候第二次换液的时候用培养基冲洗过，结果就没有细胞了，这次怕出现上次的状况，没有冲洗，很小心的换液，结果红细胞数量好像又多了，看下次换液的情况算了！

作者: snokey 时间: 2010-10-21 09:03

本帖最后由 snokey 于 2010-10-21 09:05 编辑 / L; E6 Z, C( X$ c5 i6 P
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我养过人的，培养基是DMEM高糖，FBS 10%，NEAA, L-Glutamine or Glutamax, sodium pyruvate.记得刚拿到的时候混有其他细胞，养过两三天后底部出现小黑点（将来的干细胞），换液后用培养基洗一两次，然后培养几天得到P0细胞。细胞长的太慢时可以加20% FBS.启始培养的培养皿不要太大，细胞有密度效应。培养基不要换太勤，细胞少的时候3-4天换一次，细胞多了2天一次，因为细胞会分泌很多生长因子到培养基中。

作者: 267318024 时间: 2010-10-21 09:08

回复 18# snokey 1 j, G7 v2 C% ?+ p8 v5 _9 J

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谢谢，我养的兔的，用的培养基成分里面就加了双抗，其他的谷氨酰胺等都没有加，文献上面好像也没有要求这个，我现在也不确定了，反正细胞是没有长好。

作者: snokey 时间: 2010-10-21 09:32

我养过3种人的间充质干细胞，全部用上面的培养基，效果很好。文献不可全信，养出细胞才是硬道理。你可以少量配点我说的培养基试试。注意L-Glutamine 两星期内OK， Glutamax很稳定，我一般用invitrogen的Glutamax代替L-Glutamine 。

作者: 267318024 时间: 2010-10-21 09:46

好的，我试试，谢谢了！

作者: 267318024 时间: 2010-10-21 09:55

对了你的Gutamax 以及sodium pyruvate 这两种是一起加的吧，100ml培养基中的含量有多少，告诉我一下吧？

作者: 冰激凌 时间: 2010-10-21 10:16

有污染的现象，培养液加双抗了吗

作者: 267318024 时间: 2010-10-21 10:20

加了的，

作者: lchanlon 时间: 2010-10-21 10:22

回复 10# putongyingwu + D3 `' j- F/ K( O# `" B+ r' ~% H8 j

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换培养基要多勤才行啊？？

作者: snokey 时间: 2010-10-23 07:19

我用的都是100x的stock，500 ml 里面加5 ml

作者: dyg108 时间: 2010-10-25 12:18

你应该说一下这是什么BMSC，不同来源，不同操作方法是不一样的

作者: zhj1988 时间: 2012-3-5 00:19

应该是老化了

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