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标题: 正式睾丸微注射时细胞还要用染料染色吗？ [打印本页]

作者: chenchunlei 时间: 2012-3-24 10:39 标题: 正式睾丸微注射时细胞还要用染料染色吗？

我之前一直用台盼蓝练习睾丸注射，想知道正式实验时候细胞还需用染料染色吗？
邮箱：chenchunlei2659798@126.com
希望大家可以多多交流

作者: ying 时间: 2012-3-24 14:26

要！当然要啦～好像是终浓度0.4%吧，母液配10×,非常非常蓝。那个台盼蓝没什么毒性的。而且据我的经验，细胞一定要很浓，要10^8，粘成糊糊才行。要是只有10^7甚至更低，就注不进去几个细胞。我打了GFP SSC之后在荧光镜下看了的。

作者: ying 时间: 2012-3-24 14:29

你要是不加染料，根本看不见是注到了间隙里面还是小管里面。而且我一般打的时候从最终出来的那个管子往睾丸方向扎，很重要的判断是否打对地方的标准就是看蓝色是否在睾丸上先形成一个小椭圆形区域，因为形成了以后就说明扎对地方了，再加一点力，就能进入小管了。要是没有这个参照，我10次都不一定能打进去一次。

作者: chenchunlei 时间: 2012-3-24 19:38

首先谢谢你！我之前用过滤的墨水打的，而且不是用显微操作仪直接在冷光源下注射，常常出现堵的现象。如果细胞浓度太大会不会也出现堵的现象啊。还有就是注射一侧睾丸还是两侧？

作者: chenchunlei 时间: 2012-3-24 20:05

回复 ying 的帖子
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你能把那个PDF版的发给我吗，谢谢!还有那段视频也看不了，求帮助

作者: ying 时间: 2012-3-25 14:57

本帖最后由 ying 于 2012-3-25 14:59 编辑
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回复 chenchunlei 的帖子

我昨天给你回复邮件了。在你给的那个邮箱。

作者: ying 时间: 2012-3-25 14:58

回复 chenchunlei 的帖子! j8 i5 ^/ l! ^5 Y. s4 K3 x4 k" O. |
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视频我没法下载。所以就没给你。传的paper是Brinster实验室的一篇review，很详细的。

作者: chenchunlei 时间: 2012-3-25 21:30

回复 ying 的帖子, k( Z8 h& ^9 c4 N% a
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恩，谢谢哈！

作者: 精神病院小萝卜 时间: 2012-3-25 21:56

我打的时候都不加，只在针头上蘸一点台盼蓝，指示一下打进的位置，做死活染色的时候发现台盼蓝和细胞混合在一起时间久了之后大部分的细胞都会变成蓝色，感觉对细胞有影响。

作者: yuanyan2010 时间: 2012-3-26 12:55

回复 ying 的帖子

我也想要：bingshiheyan@163.com谢谢啦

作者: chenchunlei 时间: 2012-3-26 22:04

回复精神病院小萝卜的帖子1 W2 T7 n6 m! g0 F3 I7 l

谢过哈

作者: hcluo 时间: 2012-3-27 12:02

回复 chenchunlei 的帖子9 V* J( |/ ^ O: W
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我们实验室有做一侧注射的，有两侧注射的，但是我建议最好还是注射一侧，另外一侧可以作为阴性对照，更能说明问题。

作者: 精神病院小萝卜 时间: 2012-3-27 15:08

回复 hcluo 的帖子/ n5 T6 o# a- A0 v m- E

如果只注射一侧，干细胞产生的精子的浓度是很难在自然交配的情况下使母鼠怀孕的，我们每次都是造模之后或者用w/wv鼠直接做双侧注射，在自然交配的情况下就可以得到小鼠。

作者: chenchunlei 时间: 2012-3-28 20:31

回复精神病院小萝卜的帖子! _( Q+ { ]$ }" b

谢谢啊！我们条件艰苦，没有显微操作仪，就怕干细胞在注射的过程由于操作时间过长而死掉

作者: sj03572001 时间: 2012-5-22 09:21

回复 ying 的帖子0 L6 X1 v3 ]1 q) U
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台盼蓝需要高压灭菌还是过滤灭菌吗？

作者: ying 时间: 2012-5-22 12:34

回复 sj03572001 的帖子+ j7 N6 S2 g0 J6 r' c. r
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我要是打睾丸的话，就溶解后高速离心10分钟，不灭菌。因为我觉得台盼蓝的溶解度实在不怎么的，溶解后还超容易沉淀，高速离心可以把沉淀和细菌都离心下去，然后我取少量上清加入，觉得应该没问题。

作者: sj03572001 时间: 2012-5-22 13:05

回复 ying 的帖子- I6 B# }. O& T2 }! d

这个方法不错，那高速离心的转速是多少呢？

作者: ying 时间: 2012-5-22 17:48

回复 sj03572001 的帖子

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