干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 求高手~CIK [打印本页]
作者: LL87    时间: 2012-5-23 17:22     标题: 求高手~CIK

急急急！！养的脐血CIK细胞十三天了，做流式细胞仪检测，CD3表达阳性率达93%，而CD56表达在培养10几天后只有1.78% 左右， 问什么呢？求好心高手指点！
作者: LL87    时间: 2012-5-23 17:23

别让帖子沉了，坐等高手指点~
作者: 金戈    时间: 2012-5-23 23:12

你是用什么因子刺激的，可能跟你刺激的细胞因子活性有关系
作者: 花饶然    时间: 2012-5-24 08:51

我做外周血时也遇到过，双阳性表达率很低，请问何故，也有人说双阳性细胞并不绝对影响治疗效果，是这样吗，有高手赐教不啊？
作者: 懵懂干细胞    时间: 2012-5-24 09:26

期待高手帮你解答 顶一个哈
作者: 细胞海洋    时间: 2012-5-24 10:31

回复 花饶然 的帖子) D7 B) _! H+ m% {& {0 i: b" u
& ^% \% k: U1 W
你询问谁 就点击对方帖子中的回复按钮 然后输入内容  像我这样0 p# W& `7 q1 |& H8 A

. O' E) M6 H& ?+ f0 }否则对方会看不到的
作者: wagumaxida    时间: 2012-5-24 14:50

本帖最后由 细胞海洋 于 2012-5-24 23:45 编辑
1 v* g' E: [6 ^; k8 ]
LL87 发表于 2012-5-23 17:22
8 Y8 ]! ]' J0 h4 ?3 C) Z急急急！！养的脐血CIK细胞十三天了，做流式细胞仪检测，CD3表达阳性率达93%，而CD56表达在培养10几天后只有 ...
1 ]) J! Q4 Y: V( |* C+ b

/ W" d' n7 J, x# l& M很大程度上是个体差异导致的，另外流式操作，试剂也会有影响：比如CD56抗体问题，补偿没有弄好 给你两篇文献看看 希望能对你有所帮助- I1 r4 j- I. x& c: Y) U6 S; _
[attach]42512[/attach][attach]42513[/attach]
作者: LL87    时间: 2012-5-24 17:27

用IL-2，CD3,PHA等，增值没问题，就是达不到双阳性，CD3表达的再高，CD56那么低，也不是个成功的，临床治疗效果也不会很好。& G+ c. {* s. c( q* M. D9 Q/ T
作者: LL87    时间: 2012-5-24 17:27

回复 wagumaxida 的帖子
& Z& X# w  ^& Y; ~8 p1 |
1 Z( |1 Q8 w9 {+ i我下载下来看看呢，谢谢
作者: LL87    时间: 2012-5-24 17:30

回复 金戈 的帖子
# M- g1 A$ I$ a0 h: C; N4 O! P# H8 Y& g$ c
5 L- d' \4 E- D8 D1 E加大IL-2的剂量了
作者: LL87    时间: 2012-5-24 17:31

核心问题没解决啊
作者: LL87    时间: 2012-5-24 17:35

回复 wagumaxida 的帖子
& h0 e: g5 b. {) f; T' k/ l0 B* p% ]
流式做了两次了，一样的结果，试剂也用了两种，单色用了一次，又用了一次三色CD3+CD16+CD56，结果都一样，应该和试剂没有关系的
作者: mengnancy    时间: 2012-5-25 13:11

流式检测没有问题吧，CD3都会那么高吗？我做的CD3的阳性率为66%,CD3\CD56双阳性的占29%，怎么提高双阳性的百分比？加大细胞因子用量，培养的方法等各方面在探索中。
作者: LL87    时间: 2012-5-29 08:16

回复 mengnancy 的帖子
9 |9 X5 M" ^+ \6 e; y. h
1 b. g1 v$ F4 a1 s% W你的双阳蛮高的哦，我现在就希望能达到你那么高就好了
作者: mengnancy    时间: 2012-5-29 08:25

回复 LL87 的帖子
2 e8 m% N" Y( }/ Q4 l1 v0 w/ k2 _' r: }3 D$ d! I% _
但是增殖的比较慢，寻找原因中。
作者: liutianhua    时间: 2012-6-12 18:19

本帖最后由 细胞海洋 于 2012-6-13 00:43 编辑 $ u8 r/ ^' \3 K! o
" c! Q$ p, U/ G# a
回复 LL87 的帖子
  p% }' C$ T' K8 C5 j2 A# P5 w5 H' f( x4 D1 [4 N
楼主有流式的图吗？PS：楼主用的什么培养基，培养基的重要性远超因子，cik叫细胞因子诱导的杀伤细胞，cd3+cd56+是诱导出来的NKT样细胞（注：不是NKT），所以要想表型好，不能仅仅是扩增，还要有诱导的因素在里面。
作者: lyj-0017    时间: 2012-6-29 15:45

建议有流式图最好发一下流式图和原始数据（如果不涉及保密的话），这样大家也可以帮忙做一下数据分析。个人认为，想要细胞表型数据好一些，细胞培养以及诱导固然重要，流式数据分析（包括荧光补偿调节）也是一个很重要的因素。
作者: lyd20042004    时间: 2012-7-30 14:20

花饶然 发表于 2012-5-24 08:51
* ?% P$ Z" p# {' M, {" [+ v我做外周血时也遇到过，双阳性表达率很低，请问何故，也有人说双阳性细胞并不绝对影响治疗效果，是这样吗， ...

7 c0 v* ]/ p3 p1 y4 C! a' N8 k排除其它原因，表型与培养基有很大关系，AIM-V和T551都很低，
作者: lyd20042004    时间: 2012-7-30 14:21

LL87 发表于 2012-5-23 17:22 # S' p" m$ V/ |0 H; Q: Z
急急急！！养的脐血CIK细胞十三天了，做流式细胞仪检测，CD3表达阳性率达93%，而CD56表达在培养10几天后只有 ...
; B1 [* S4 q( y) B/ Y! K
活化的不好
作者: mengnancy    时间: 2012-8-6 20:17

回复 lyd20042004 的帖子7 [# K2 ]+ b$ B/ {' a

( @; O' V+ l* }% ?' H$ T8 m5 J5 s那用什么培养基，双阳性能提高呢？如果IL-2提高浓度，能使CD3CD56双阳性百分比提高吗？
作者: mengnancy    时间: 2012-8-6 20:18

回复 LL87 的帖子
# y9 V; e* `$ H7 j7 x
4 b3 @9 M) ~' y" `/ j$ ~) L; [/ n如果IL-2提高浓度，能使CD3CD56双阳性百分比提高吗？
作者: mengnancy    时间: 2012-8-6 20:19

回复 LL87 的帖子
' r  y/ M1 |: N1 I0 c
" e2 ^$ z9 |; b3 o) a# H我也遇到同样问题了，求解
作者: lyd20042004    时间: 2012-8-6 23:29

mengnancy 发表于 2012-8-6 20:18
9 e4 I( ?+ W9 g1 S. ?& P回复 LL87 的帖子0 {5 {' I/ S% C! v4 e8 z
& h. w+ ?( q8 G
如果IL-2提高浓度，能使CD3CD56双阳性百分比提高吗？
2 I- J* w& v' @" u0 ^1 C
IL-2不可能提高比例
作者: mengnancy    时间: 2012-8-7 09:06

回复 lyd20042004 的帖子
( `& y, ~* m  |, d9 M' F/ ]7 ?2 r' A5 h9 B" A9 I5 J' `. E
请问怎么能使CD3CD56双阳性细胞百分比提高呢？
作者: lyd20042004    时间: 2012-8-8 20:56

mengnancy 发表于 2012-8-7 09:06
( ?' m9 I, e! ?$ a回复 lyd20042004 的帖子$ u( a0 F8 a, a! L( O

$ W  u2 C. x3 \' k9 J请问怎么能使CD3CD56双阳性细胞百分比提高呢？

! ]7 ?' U) S& B. Q9 E$ i您能够做到多少呢
作者: liutianhua    时间: 2012-8-15 10:19

回复 LL87 的帖子2 T1 w% Y6 e/ J. b: \4 q

. `5 k- d9 L6 [1 M! ?这个双阳比例和很多因素有关，第一要检查流式工艺以及上机后的操作有没有问题，第二是和培养基关系最密切。
作者: liutianhua    时间: 2012-8-15 10:20

回复 花饶然 的帖子
0 ~/ V# Y# O( F; N; R$ u( l4 Q4 C5 L; r/ v
你用的是什么培养基？



欢迎光临 干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/) Powered by Discuz! X1.5