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标题: 请教大牛有人做过猪的BMP15启动子吗？请不吝赐教啊！ [打印本页]

作者: qmm0303@163.com 时间: 2012-6-15 08:17 标题: 请教大牛有人做过猪的BMP15启动子吗？请不吝赐教啊！

本帖最后由细胞海洋于 2012-6-15 09:19 编辑
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有人做过猪的BMP15启动子吗？请不吝赐教啊！

作者: 细胞海洋 时间: 2012-6-15 09:19

详细说一下你的问题吧

作者: weiyepan 时间: 2012-6-16 01:32

你是有启动子做不出转录还是启动子弄不到啊?

作者: qmm0303@163.com 时间: 2012-8-24 11:52

回复 weiyepan 的帖子% V1 B) z" v! l6 ?

1、猪的BMP15基因启动子序列是BMP15基因起始密码子ATG前的区域码？我找了ATG前 2000多bp的区域，在线预测启动子核心元件却没有，不知道是什么问题。5 g6 n% ~$ b" L
2、引物设计的酶切位点和防止移码的碱基该怎样添加？有点头大。

作者: weiyepan 时间: 2012-8-24 21:49

1. 是的，一般启动子集中在900~1500左右的区域，但也有在很上游调控的例子。不过在线的启动子预测一般是根据现有的数据库做的，单一个数据库做出来的结果不一定准确，你要先找对物种和Pol才能比较准确的预测出来。
2. 启动子一般比较难扩增，主要是区域内部GC分布不均匀。我们设计是从ATG前的序列开始，往3'端1500bp左右，主要看Tm不要看长度，一对引物要比较平衡，温度差最好不要超过5度。剩下的酶切位点就往5'端加就行了，加上去的序列不用算Tm值。如果想提高成功率，可以往外设计nest引物，特异性也会高很多，Tm的选择也会丰富很多。另外，PCR的时候加入DMSO和Betain，会增加产量。

作者: qmm0303@163.com 时间: 2012-9-14 10:04

回复 weiyepan 的帖子
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谢谢，受教了！

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