干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 帮忙看下小鼠BMSC [打印本页]

作者: wbs1986 时间: 2013-4-15 15:54 标题: 帮忙看下小鼠BMSC

最近用骨片法分离培养小鼠BMSC，小鼠为12周，年龄是有点大，原代培养骨碎片附件长出形态较好的MSC，但增殖较慢，未完全融合，且有杂细胞（虽然比以前全骨髓法培养杂细胞少）。传代后细胞虽继续增殖，但杂细胞依旧很多，而且形态发生很大变化，都不确定是不是MSC了，这两张是P2代图片，请各位看下除了很细长的杂细胞之外，其余的是不是MSC。是状态不好，还是根本就不是，非常感谢。2 m/ K# L9 I& i3 |7 e' U* f" N
[attach]50998[/attach]7 @2 {) _" A* E9 j
[attach]50999[/attach]

作者: gghywtfz 时间: 2013-4-15 16:05

有部分细胞扁扁的是分化掉了吧。# E; v8 q6 ^0 [* M' T$ {
没什么关系，消化的时候后掉下来的那些细胞就是这些分化掉的细胞，控制好消化时间就好

作者: bty007 时间: 2013-4-15 22:38

我也是用骨片法养小鼠msc的，有时候拍出来照片细胞全部特别扁，后来发现是显微镜的问题，不知道你的是不是也跟显微镜有关系，感觉正常情况下第二代细胞应该不会全部像分化似的没有立体感吧

作者: shagu 时间: 2013-4-16 08:46

我认为你的细胞状态挺好的，立体感也行，至于发亮的细胞，和显微镜有关，我的P2时，细胞都爬的扁扁的，伸出突触变为多边形细胞，P3时鉴定结果纯度符合文献MSC要求，所以继续观察吧！另外，细胞形态不能说明问题，主要的是分化能力测定和标记为鉴定。个人意见，仅供参考！

作者: wbs1986 时间: 2013-4-16 15:17

回复 gghywtfz 的帖子
5 G& H/ d, c- z0 v4 \: O
这两次传代的时候消化都挺快的，1-2分钟就大部分细胞都消化下来了，下次再消化短点时间看看

作者: wbs1986 时间: 2013-4-16 15:20

回复 shagu 的帖子
9 X! G X2 D5 ?, @ ]7 x% [# c
我这几天再做下分化实验，图中发亮的细胞很多很细长，像这种杂细胞很多，到P3代鉴定时应该纯度不够吧。另外现在有个疑惑就是那些扁扁的细胞一块一块的，都不知道是几个MSC，还是很多MSC聚集在一块。

作者: fengxiwu 时间: 2013-4-18 01:54

回复 wbs1986 的帖子' e( Q, j4 e7 D

不知是否有条件尝试一下密度梯度离心分离骨髓单个核细胞培养MSC，当然，也要看实验目的，有没有必要。MSC本就是一群异质性的细胞群。

作者: wbs1986 时间: 2013-4-19 09:40

回复 fengxiwu 的帖子
1 h: E9 i' L& P
以前是一直用骨髓密度梯度离心分离后培养的，但效果很不好，基本都是杂细胞。

作者: fengxiwu 时间: 2013-4-19 11:48

回复 wbs1986 的帖子6 w# U9 ]- c1 p, _5 F* y2 D

我做的是人的骨髓细胞培养，人用的梯度离心液和老鼠用的是不一样的，间质干本来就是一群很杂的细胞，异质性很高的。而且生长是一个缓慢的过程，间质干是慢慢爬伸的，逐渐变的更加的细长呈梭形（大部分），也有其他多角、宽大等不规则形的。
基础培养基，血清类型及浓度，很多因素影响细胞的状态。多查资料，文献看的多了，加上你的经验积累，会越来越顺利的。: g& l9 T7 b' A! c3 G( h2 Z

作者: cuizhuzhu 时间: 2013-4-22 18:51

你多养一段时间试试！我的也这样，传到第三代突然就好了！血清质量很重要！

欢迎光临干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)