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标题: 慢病毒超速离心沉淀法 [打印本页]

作者: bishengrong2011 时间: 2013-7-4 16:01 标题: 慢病毒超速离心沉淀法

超速离心沉淀法( I6 V4 Z0 f0 N' @& `

1. 取6个Ultra-clear SW28离心管，用70%乙醇消毒后，放在超净工作台中打开紫外灯继续消毒30分钟。
2. 每个Ultra-clear SW28离心管中加入约32ml的预先处理的病毒上清液。1 a( V- k& |8 _" {5 G0 `
3. 取一支10ml的移液管，吸取12 ml 20%的蔗糖溶液。将移液管一直插入到离心管的底部，缓慢将蔗糖溶液打出4 ml。同样地，将剩下8 ml的蔗糖溶液分别加入到另两个离心管中。另取一支干净的移液管，对剩下3管进行同样处理。( ]1 L. q; B. c5 d1 @* b* }
4. 用PBS调整各管的重量，使对应的离心管之间的重量相差不超过0.1g。# s" M! s) N/ S) b
5. 按次序将所有6个离心管放入Beckman SW28 超速离心转头中。- I. W5 y1 b3 G. e6 z
6. 4℃，25，000 rpm. (82，700g) 离心2小时。
7. 小心将管子从转头中取出。倒掉上清，将离心管倒扣在纸巾上放置10分钟使剩余的上清流干。吸掉剩余的液滴。在管底应当有可见的沉淀。. f. i. }; @4 d$ _; @7 k2 j
8. 每管中加入100ml 不含钙和镁的PBS洗下沉淀。$ s7 ~% h/ o; A$ f/ o
9. 将SW28超速离心管插入到50ml锥底离心管中，盖上盖子。: E9 s M8 b a* L+ o
10. 在4℃溶解2小时，每隔20分钟轻轻震荡。( t& _0 R7 o4 X5 }' q% Y
11. 4℃，500g离心1分钟，使溶液集中于管底。
12. 用200μl 移液器轻柔吹打使沉淀重悬。避免产生泡沫。将所有管中的液体集中到一个SW28离心管中。+ Q& K _0 l# g6 ?3 ^4 a- ~ s
13. 集中后的病毒悬液分装成50μl 每份，保存在成品管中。用碎干冰速冻后储存在-80 ℃。

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