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燕北飞 发表于 2012-6-6 17:09

mRNA的表达量与Western blot检测的一致性

大家有没有碰到过这样的情况，检测某基因的表达量时，qRT-PCR和Western blot检测不一致？

runsong 发表于 2012-6-6 19:07

有的，有篇文章上检测sox2在小鼠睾丸上的表达，RNA很强，蛋白没有。

xiaomao_zhoubo 发表于 2012-6-6 23:10

转录后需要翻译才能产生蛋白，而翻译受很多因素调控，因此两者不一致是有可能的

燕北飞 发表于 2012-6-6 23:36

[b]回复 [url=forum.php?mod=redirect&goto=findpost&pid=655418&ptid=56837][color=Olive]xiaomao_zhoubo[/color] 的帖子[/url][/b]

呵呵，我再加一句，miRNA不需要翻译成蛋白，所以qRT-PCR用来检测miRNA的表达效果是可信的，检测某基因的表达却不一定可信。

minshuyin 发表于 2012-6-7 09:27

[b]回复 [url=forum.php?mod=redirect&goto=findpost&pid=655431&ptid=56837][color=Olive]燕北飞[/color] 的帖子[/url][/b]

您的意思是miRNA在RNA水平和蛋白水平不可比？

illidancui 发表于 2012-6-7 09:40

miRNA属于非编码RNA，以RNA形式就发挥功能了呀。

燕北飞 发表于 2012-6-7 14:35

[b]回复 [url=forum.php?mod=redirect&goto=findpost&pid=655672&ptid=56837][color=Olive]minshuyin[/color] 的帖子[/url][/b]

是mRNA与蛋白水平很多情况下是不一致的。miRNA只有RNA水平，没有蛋白水平。

linzi214 发表于 2012-6-7 15:35

真正起功能的是蛋白，由于mRNA转录出来受miRNA调控和其他修饰的调控，因此mRNA不一定翻译为蛋白，功能蛋白检测蛋白表达水平结果更可信（miRNA除外）。

minshuyin 发表于 2012-6-9 09:20

[b]回复 [url=forum.php?mod=redirect&goto=findpost&pid=655980&ptid=56837][color=Olive]燕北飞[/color] 的帖子[/url][/b]

是的，但是很多人做miRNA实验，发表的论文中经常会有mRNA水平变化不大，蛋白水平差异明显啊。

燕北飞 发表于 2012-6-10 20:00

[b]回复 [url=forum.php?mod=redirect&goto=findpost&pid=657132&ptid=56837][color=Olive]minshuyin[/color] 的帖子[/url][/b]

你说的这个是miRNA的调控方式问题，从miRNA沉默靶基因mRNA的方式上分析，miRNA不会降低靶基因mRNA的水平，只能沉静蛋白表达，我个人不认同很多文献里细胞实验的结果。感觉改变miRNA水平后的细胞拿来做基因芯片筛选靶基因的方式不可信！

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