为什么G418筛到的阳性细胞 ,扩大培养后阳性又丢失了呢?
给位大侠,谁能解答一下,电转后,用G418筛选细胞,挑出的克隆初步鉴定时是阳性,可随着扩大培养,阳性细胞就丢失了,这是为什么?这里说明一下,在刚刚挑到克隆时为了能够使细胞快速生长 ,就选择培养基不加药(G418)培养一天,之后都是半量加药德培养基培养,可穿了3代后,就检不到阳性细胞 ,不知该怎么办 首先,你确定你筛到了你想要的细胞系,不是假阳性出来。另外一个常见的现象是,细胞转入外来基因,给生长带来一定的压力,为了生存,生长过程中这些外来基因可能会慢慢丢失,你G418加少了,这些丢失外源基因的细胞也可能生存,为防止影响后来实验,早起挑克隆扩增后,需要多保存一些,以备不时之需。但是如果是才3代就没有了,的确有点早,或者你转入的基因片段比较特殊。
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