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楼主: 芷瞻	go [原创] 基于pSUPER载体的shRNA通用构建程序 [复制链接]

runsong

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楼主

发表于 2011-8-14 22:11 |显示全部帖子

做得真好

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runsong

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沙发

发表于 2011-8-15 11:11 |显示全部帖子

有两个问题请教。- Y' |' C6 w9 Y1 u1 T& d" [
1、在U6启动子启动shRNA表达时，你是如何保证U6启动子的固定转录起始位点落在target sequence sence前的。你所加的通用引物骨架模板中的5-GATCCCC是不是起的这个作用。6 U1 L- C8 J; N0 `; l N
2、合成的4条引物在变性退火后要不要用磷酸化酶处理一下，既然是普通的引物合成，那么5‘端是没有磷酸基的。还有你们要用4条引物，为何不用2条长引物呢，是怕突变吗。