请教MII期卵子染色体扩展

xiaomingxu

楼主的问题真的是一个很棘手的问题，我们也尝试过做MII期卵母细胞核型，但效果也是不理想。
* r5 V8 b+ ?& G! l6 i% y但可以就一些细节问题进行切磋：我们尝试的方法是，先AT去透明带，PBS清洗，然后，醋酸钠+BSA低渗（可以尝试KCL低渗），TW-20/HCL固定（楼主用甲醇：乙酸=3:1固定确实很剧烈，会发生卵母细胞找不到的情况，所以要尽量控制加的固定剂的量），后面常规操作，遇到的情况与你基本相同，有时可以见到完整的染色体，但有时染色体散的很开，也遇到染色体凝集在一起的情况。改进中......

xiaomingxu

回复 yahyo 的帖子1 _$ y1 s& i6 v  S0 X
9 Z7 [& N% H1 C# z
不知道你所说的成功率是指什么，如果只是看到核，那基本没什么问题的，如果要得到很好的分散染色体，那就比较低，大部分是分散度不好。

xiaomingxu

回复 hcluo 的帖子
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低渗液：1% （W/V）醋酸钠+0.6%BSA;时间5-10 min；4 u1 V0 u% B. G: n% `, L. b5 w9 {: s
固定液：10 ml 五蒸水中添加10ul的HCL 和10 ul的TW-20;时间要自己把握哦；  u( Z" m; I' q5 T& \& o1 w3 \
AT是酸性Tyrode，去透明带用的，PH2.5，1min左右即可。. w: n2 H+ t, l- X' w4 F
你们可以尝试一下，然后共同改进哦。

xiaomingxu

回复 yahyo 的帖子6 t$ J' U% O9 m0 c2 i  x/ M$ o( u

( [3 [7 b3 n  K- Y/ X确实遇到这种情况，你可以用玻璃笔在玻片下面画一个很小的圈，然后把卵母细胞转移到其中，体视显微镜下操作。