应用怎么样的培养技巧可以获得更完美脐带间充质干细胞

zarecol

抛砖引玉，酶解法和机械法均可获得比较理想的原代细胞（各大文献中方法都很详细，也很到位请各位查阅，在此不做解释），但怎样保持细胞状态常常是我们在实验室培养工作中的难题，稍有不慎细胞就会出现各种问题，有时让还真让我们头痛。
. x/ R0 p/ i- m. @) v常常看到很多回帖的仁兄发表细胞养到10代20代仍然保持良好的形态，心中十分羡慕，所以发表本帖也是有感而生。
3 u3 A2 Q9 P* ^0 S. \首先献上我的经验之谈，希望我们能共同探讨，相互学习。脐带间充质干细胞培养，分离方法有酶解法和机械法，两者获得的细胞状态都差不多，机械法的细胞较好，对细胞损伤小，但缺点是时间长几天，不过个人感觉利大于弊。所以我推荐采用机械法分离获得原代细胞。这个步骤的关键我认为是速度，为什么这么说呢？原因在于所用脐带的离体时间和开始分离到培养液接触组织块的时间决定了原代密度达到80%融合所需要的时间。培养液的选取也很重要，DMEM和DMEM/F12的培养液作为基础培养液都是不错的选择，血清建议采用进口血清浓度10%。传代时采用0.25%胰酶37摄氏度进行消化，终止消化采用等量血清。
7 e0 u' S3 j" f( Y以上是我培养细胞时采用的方法，但并不能每次都获得形态良好的细胞，这是我的问题所在。
1 k8 l* s9 P. K) H细胞形态保持3代左右的长梭形，之后细胞开始向扁平状发展，而且培养液变黄的很快。希望大家能给予我这方面的帮助。谢谢。
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zarecol

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消化终止点怎样确定呢？细胞长到多少密度的时候传代最好呢？

zarecol

回复 sdwzg119 的帖子) Z+ \( {4 b# U0 a# Y, w. v

' f8 q" {+ N9 r3 h2 q  l谢谢！