【请教】外周血分单核细胞培养DCs的详细步骤

大少爷

1.我们用久保田的离心机，第一次1500rpm（大概400g），10min，第二次1200rpm，10min，第三次1000 rpm，10min。% U$ @8 W7 r' e3 q
2.淋巴细胞贴壁获得单核细胞时：8 o$ G$ q- u( r" k* t6 E
A.贴壁时不加血清，不加细胞因子。" f% l$ R! s& ^* ?- V, d
B.贴壁时间是2.5h2 B4 k* v3 w3 e- a1 C, J  N
C.贴壁时是在培养瓶中或培养皿。
" @0 w+ ^( [& s  I0 b- a# x) S% o9 O* @4 u* w, K
3.单核细胞诱导培养成未成熟DCs这一步：
% Z2 x" @9 n/ k- x& Q2 T A.换液间隔一到两天，半量换液2 |3 m( q- j6 `% h" q9 f5 t$ H9 S
B.换液时所用培养液中因子的量是1000 U /ml的GM-CSF和1000 U /ml的IL-46 c8 [9 b) A  ?  b! p5 w
4.未成熟DCs诱导成为成熟DCs这一步：
0 D/ V  e1 f8 z/ z! U/ R A.在第五天开始诱导! }3 H: W% z4 H+ E( e5 s* h
B.用TNF-α进行诱导，量是50ng/ml。1 A) C% \/ K  Q* O& [: C
  C.诱导时还要继续添加GM-CSF、IL-4。
: f$ J+ d% f# K) c  D.诱导一到两天，显微镜下观察细胞，细胞变为毛刺状悬浮细胞，终止培养，可以收获。

大少爷

1.我们用久保田的离心机，第一次1500rpm（大概400g），10min，第二次1200rpm，10min，第三次1000 rpm，10min。
# K" X. o: p6 g. b: b# A- B2.淋巴细胞贴壁获得单核细胞时：
) H7 Y9 p3 a1 s* W7 g: u: ^ A.贴壁时不加血清，不加细胞因子。, u6 W/ [9 f  Y" [. a1 G, A- x
B.贴壁时间是2.5h* [5 e7 \7 I* m( e& X% W. M- I! H" c
C.贴壁时是在培养瓶中或培养皿。
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1 H) A6 t8 I: ^3 \$ U. h3.单核细胞诱导培养成未成熟DCs这一步：
8 Z8 n8 {# o* }' m: s3 F A.换液间隔一到两天，半量换液
% S) V2 [: K. L9 e  c* ?# yB.换液时所用培养液中因子的量是1000 U /ml的GM-CSF和1000 U /ml的IL-4. n0 f! V8 z7 B* e8 b% a
4.未成熟DCs诱导成为成熟DCs这一步：
! O/ Q2 t/ J7 ]& R; t9 X0 i A.在第五天开始诱导1 G3 n5 t" _6 z$ e5 u
B.用TNF-α进行诱导，量是50ng/ml。: q# x* E" f# d
  C.诱导时还要继续添加GM-CSF、IL-4。
6 U+ L5 x) b. ?  v  D.诱导一到两天，显微镜下观察细胞，细胞变为毛刺状悬浮细胞，终止培养，可以收获。

大少爷

活性单位U与质量单位ng好像没有换算关系，每种抗生素好像都不一样。。。

大少爷

是的，50ng/mi( v- Z* s3 p. h4 e" S