小鼠BMSC原代细胞贴壁太紧！！求助~~

绝对忠橙

我觉得有几个方面：5 s0 U# c: z* s9 `3 \7 f
1.准备消化前，把胰酶放入水浴锅，温度正常后放入超净台。
+ L- u. m" k% x2.倒掉废液，PBS冲洗两三次，其实吹打不会将杂细胞吹打下来，即使是造血干细胞这种悬浮细胞。
. ~4 T+ O6 K/ r4 h1 R1 n. [+ M3.加入1mL0.125%胰酶+EDTA后轻轻摇晃，要保证所有细胞都被消化，至半数细胞漂浮，半数边圆时加入完全培养基终止消化。' j/ u) ?  q8 `9 G4 \+ v
说句实在话，真正的bmsc应该集落很明显，而且消化很容易，根本不用胰酶加温，冰箱拿出加到培养皿里边摇晃几下细胞两分钟就消化到位了，我可是用的0.125%的胰酶哦，楼主细胞这么长，像10代之后的细胞了。

绝对忠橙

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' @$ g, t! K5 d" j: e6 y' Y- P' s3 B
生长因子肯定要有的，bfgf，谷氨酰胺类似物都要加

绝对忠橙

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4 \- [4 H" W3 g% s# q3 i这个和细胞接种密度有关系，我的经验是一只大鼠的细胞放两个T25里边，一般情况下5天或者6天就可以传代了

绝对忠橙

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8 {% n! e0 f9 p% ?5 G' f1 ~3 b8 l0 J$ T
不加形态会很难看