脐带间充质干细胞培养问题

shuimochunlan

请教，都知道在脐带间充质干细胞的传代培养中，需要消化后吹打均匀传代，才能生长的好点，我们在吹打的过程中，总是遇到细胞成片脱落，形成膜状，较难吹打均匀，请问造成这种现象的原因是什么？是因为消化时间太短？酶浓度不够还是别的什么原因？怎么解决？（我们是用的0.05%胰酶，消化3-5分钟，在培养箱内消化的）

bj123

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% R. k% P( [6 q3 D- a$ t2 A消化时间太长，导致DNA裂解。

lady

额 木有遇到过。  我们都是稍微变形，就开始吹打。。。木有消化那么长时间...

ytumuyangren

成膜片状，应该是你的细胞长过了，MSC如果培养时间太长，会长成膜片状，这样在消化的时，得到的就是膜片状。所以楼主可以在细胞长至70-80%，开始消化进行后续试验，

shuimochunlan

回复 ytumuyangren 的帖子; g" N+ d  `( C3 X: f6 Z
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我觉得可能是生长过了，我们培养的是养了两天，第三天就开始传代了，要是这样也生长过的话我们就要培养一天半就要传代了

shuimochunlan

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我们也观察的，时间只是预定的而已，不会是消化时间长了

CELL007

可能传代密度高吧。

三月桂花香

传代密度过高？导致细胞长得太密了吧，消化的时间是不是稍微可以缩短点，我们用的是0.125%四分钟，传代接种是到达78-80%漂浮就传代。

shuimochunlan

回复 三月桂花香 的帖子5 r/ d' b- O) O, ]# [; W& \+ C& c

4 n- N% x, C' R* z% s: T. {* H, K: `0 p这个是很有可能的，下次考虑两点，一，降低传代时的接种密度，现在是一传二，可以考虑更改为一传三；二，密度不变的情况下考虑缩短培养时间。

shuimochunlan

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细胞长成膜状对细胞的损害到底有多大呢？除了造成细胞过早衰老还有什么危害？
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