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[请教] 请问,western blot 时,若果内参基因和目标基因大小很接近,怎么办啊? [复制链接]

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楼主
发表于 2009-6-17 11:54 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
请问,western blot 时,若果内参基因和目标基因大小很接近,怎么办啊。膜不能剪开?
7 p) L9 ~' |5 O, a7 }, b. z十万火急

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沙发
发表于 2009-6-17 12:07 |只看该作者
能不能做一下等点聚焦啊?这样他们根据电荷的差异就可以分开了
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优秀版主 专家 金话筒

藤椅
发表于 2009-6-17 12:34 |只看该作者
明显应该同时跑两块胶啊,相同条件下。一块染actin  一块染目的基因。   实在不行你就一个一个染吧  先染目的基因  然后再把抗体洗掉  染actin
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优秀会员 金话筒

板凳
发表于 2009-6-17 13:12 |只看该作者
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可以选择差异较大的内参,比如b-actin、GAPDH等。相差10kDa左右就可以区分开。2 a0 Y- ?3 T; R% S7 G
先染一个,洗了再染另一个也是个办法。
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报纸
发表于 2009-6-17 22:26 |只看该作者
保险些:一个一个的染吧
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发表于 2009-6-18 13:25 |只看该作者
通常剪开染。太接近可以调整分离胶的浓度,分子克隆上有表格;我们还常用的就是像做磷酸化先染目的洗脱后再染对照。正常情况actin能够再脱膜3次后还染上的。跑两个胶不推荐,容易条带形状不同,发文章有的问题。
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