人脐血间充质干细胞讨论区

slau

肝素是细胞外基质之一 ，对渗透压改变小，临床上做红细胞渗透脆性实验，就是肝素抗凝。多了为什么会溶血？我曾经用过200-300U/ml BM 也没有见到溶血。肝素多了常见的是血小板黏附，成团。

slau

肝素作为一种生理性抗凝剂，有着不改变细胞渗透压的优点，所以不会导致溶血，相反还有抗溶血的作用。我把其它一些能改变渗透压的抗凝剂的溶血作用记串了。肝素过多会引起血小板聚集，同时也会引起白细胞凝集，而后者对于干细胞提取的数量是有影响的，所以还是适量使用的好。

slau

脐血里面到底有没有MSC，现在这个结论还没有定下来' m/ E& d. `! f" V0 b; j1 W
有的文献说分出来了，有的直接下定论没有
8 @8 k0 a7 O* h4 n' E' T) L% C我觉得从脐血里分MSC意义不大，脐血里最丰富的是造血干细胞，干嘛要买椟还珠那？要分离MSC还不如从脐带胎盘中分离那，不也是废物吗？

slau

可以用，得到的MNC会很高，但是包含了的大量的晚期阶段的粒细胞。4 v2 y! C/ N' ^% Q4 M
用密度离心可以得到的淋巴细胞群的细胞会更多，用1.064密度的好象还可以得到更到的CD34，但得到的MNC也更少。

slau

啊，这么多高手，但各有各的搞法，不好决定自己用什么方案。之前本人只搞过骨髓的MSC，现在发现脐血的好象很麻烦啊！
& T# `" @# W! R, _  s( V请教ven15和hardtc，用柠檬酸钠抗凝可以吗？有没有体会，最少需要多少脐血才够培养出一批MSC？培养体系中的bFGF是必需的吗？有没有人尝试过用CD133等磁珠分选后培养，是不是情况更好些呢？

slau

zhangsheyi wrote:3 ?; L1 a8 Q( e
非常谢谢hardtc战友！我的实验终于有些进展了！可是细胞好像长的好慢啊！我的原代细胞已经有二十天了好像还不能传代还没有见到hardtc战友说的融合80％的克隆！是不是有什么问题？5 o4 @3 H; B/ J" Y; F
呵呵！我一直在不停地问哈！望不吝赐教！
2 m; {+ i, Z6 i9 E你采了多少脐带血？你的梯度离心多长时间？离心速率多少？你干脆把你的操作过程大致说说，如果你的脐带血采集量大过50ml，而且是在产后8小时之内操作，应该可以获得很多干细胞，我下来给你把我们做的脐带血干细胞的图片发上来
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1 b6 k# u/ ^# o0 c! R4 _0 z" E6 C3 l请教zhangsheyi ，您做的脐带血干细胞是造血干细胞嘛？细胞因子的用量是多少？

slau

我的一批细胞一直长的很慢，大约原代三十天左右细胞好多就老化并死了，真是让人难过。这到底怎么回事啊？条件好像也很好了，能指点一下吗？谢谢！

slau

我也在养外周血来源的间充质干细胞,我觉得铺上胶原,细胞贴壁的多.
# Z, ~6 Q; ~: G2 H8 n: k3 F  |应该和脐带血的过程一样.请问,分离MSC必须加 bFGF 吗?

slau

最近看文章好象说用6%羟乙基淀粉沉淀法分离MSC比较好,而且首次换液时间以7天较好(中国实用内科杂志,2006年3月vol36-5),请问各位战友是这样的么?

slau

我开始也打算用那个羟乙基淀粉沉淀法来的，但考虑到不够纯，就还打算采用传统的ficoll方法了。我想接种密度是关键，还有就是换液了。偶还没有开始实验，现在只是在空谈。请不要见笑