关于脐带消化的问题

西瓜太郎

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* Y8 w2 W+ H( G5 \你好，你的试验中提到“加入 4ml 的消化液（含 0.25%胰酶，200~400U8 c5 K) r& }1 h# a1 E
胶原酶Ⅱ/ml的PBS 液） ，混匀，37℃中消化1 小时，每隔10 分钟振
+ B3 D0 r+ x$ \0 W: `9 w摇一次”。我想问一下，你的4ml消化液具体是怎么配置的？因为我是才做实验的，也许这个问题很简单，但是。。。3 g3 ?) q) E; t: X
谢谢你赐教啊

柏林小杨

回复 9# 157238360jwj
; }3 v' R, k& N6 _5 T/ V. o
0 [% h/ t9 Q: H
3 i+ ]+ b/ M& b  U9 O7 e    请问你们消化之后细胞悬液还粘稠吗？细胞得率能到多少？

xiaodiao123

我也只用胶原酶消化，用量较大，时间比较长，学习了

157238360jwj

我们用的是（胶原酶1+透明质酸酶+Dispace）全是2mg/ml,胶原酶1加2ml，其余两种加1ml,37度培养箱20小时。。

penny200903

“两头用动脉夹夹住或丝线扎紧”请问这样做所起的作用是什么？这样有利于把间充质消化出来吗？

niyou

我们用的是0.1% 2型胶原酶+0.05%胰酶（Gibco,含0.02%EDTA）1:1混合，37度消化30分钟。注意脐带保温及无菌操作，两头用动脉夹夹住或丝线扎紧，放入预温的无菌大培养皿（加有37度PBS）中，37度培养箱中放30分钟。水浴锅太脏，尽可能不用。

wuxiao101325

http://www.stemcell8.cn/viewthread.php?tid=18220&extra=

wuxiao101325

据我们实验室的经验，双酶法与单酶法（过夜）效果差不多，也没见细胞有什么明显的损害

wuxiao101325

你所说的损害是否细胞不生长或长得少？

zhujiang007

回复 2# wuxiao101325
# w+ o, I; @/ o1 S# Y: Q: d+ q1 y6 x1 \2 \7 m$ `

- j  O2 d; o. v4 |( Z- Q    你用的是双酶法，胰酶的作用力很强，稍有不慎会对细胞损害，我只用胶原酶消化，但是量非常大，时间很长，你有何想法？