单细胞克隆、克隆形成实验、肿瘤球培养

570505

这三者是一样的吗？盼望一个稍详细点的解释。

86964109

回复 wenyoubiepa 的帖子
& D$ y4 x: ~, Q. a& h' J. C( v7 ~0 C- D
不好意思，我也没养过，得到的信息都是来源于网络中大家分享的，http://www.dxy.cn/bbs/topic/16920599 ，
2 j+ I+ ^. J2 r" Lhttp://www.google.com.hk/search? ... 3%E5%9F%B9%E5%85%BB0 x7 R9 ^# d" Z  E7 _- |
http://www.csno.cn/pdf/2011/1/7.pdf
8 Q- ?! K2 e$ G可以看下是否对你有帮助，还是建议直接google比较好

wenyoubiepa

3 k3 C* n* ?0 N9 M
/ J# }; g+ F3 n
回复 86964109 的帖子
) ]( A8 k$ c- p' U" d7 G* {
5 k- A: o7 c6 N. M, D- c- j' e受教了，我也想做肿瘤球培养实验，您传我一份详细的操作步骤吗？谢谢！

YMM

回复 86964109 的帖子) Q" l- x; W* k% X. I% ]9 A
, z  T2 L2 Y- p; e
嗯，好的，我再查查相关资料。非常感谢您的热情帮助

86964109

回复 YMM 的帖子7 y+ s0 u6 E% K/ N7 C

7 b8 k; C0 x) A  @1 {/ fsorry，好久没来了，才看见，不过我也不是专门做这个的，& o( H8 H, A# e  ^1 t5 V! \" w6 W
一 Single-cell cloning self-renewal assay这个也不太了解，看看这几篇文献是否有用http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC319624/% n* F' F: ?6 c$ S7 {
http://www.pnas.org/content/105/36/13427.full
, E0 z) N) c2 j) @/ y' i) M6 e' ]二 至于克隆形成实验网上成型的protocol应该有很多了，我们一般就这么做  q7 L$ `+ k4 s2 t2 [0 d" F
1细胞培养于含有10％胎牛血清的DMEM培养基中，在37 ℃、5％CO2、饱和湿度条件下的细胞培养箱中培养，细胞贴壁生长。实验均选用对数生长期细胞。# v1 o) N4 A5 p& a6 U) c3 f
2细胞铺板：前一天将培养瓶中细胞用0.25%胰蛋白酶消化，接种100细胞至6孔培养板中，，在37 ℃、5％CO2、饱和湿度条件下的细胞培养箱中培养2-3周。
- h3 C3 E9 `6 j: G; o! c6 S) O3当出现肉眼可见克隆时，终止培养，弃去培养基，甲醇固定，Giemsa染色试剂盒进行染色。9 q; S4 @: R9 r0 ^- W# ?4 ^- l' Z- A
4弃固定液，滴入染色液I覆盖细胞表面，室温染色8 min，加入2倍体积染色液II，反应3 min，弃去染液，PBS清洗，镜下观察计数。（克隆形成率=克隆数/接种细胞数×100%）
, A, x2 C1 g/ y/ K* n大概就这样，很多文献中还会提到铺上琼脂什么的，

YMM

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7 U, d- D5 h( @( `/ O8 m
+ B" p) A) d) @: F' X8 M- `好的，谢谢

细胞海洋

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! `/ n( i" I7 z5 N  d3 |9 T9 F% u/ b* h2 Q- B. s% P: W
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YMM

回复 86964109 的帖子
7 n$ n3 G! h3 i5 c/ L4 N# O' H. Y; ^% b5 T  n7 v/ g
您好，能否向您请教Single-cell cloning self-renewal assay和Colony-forming assay的具体操作方法？本人对此一无所知，请您不吝赐教，非常感谢

86964109

1 R- P2 {0 j. i1 J+ K6 t

6 N/ M- V' ?; m, Y回复 570505 的帖子
) B2 n* p7 \, X) {8 g4 ~  S3 r6 E- N& b
我其实也不是很懂，大体理解就是两个实验的目的和方向是不同的，前者是一种肿瘤细胞新的培养方式，后者用来检测细胞增殖能力（我们这边主要用来作这个），而且肿瘤球是立体生长，而克隆形成是平面扩增，不知道这样理解对不对

570505

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6 @. a* B$ X: w  I
) h) T4 L  A8 z3 |9 f) x! t还是没有明白，肿瘤球培养和克隆形成实验在试验方法和实验结果上有什么不同？两者的培养条件好像都一样，都叫“stem cell culture medium”。 只是接种培养的细胞不同吧？前者是整体的肿瘤细胞，后者一般是来鉴定干细胞。