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细胞复苏的注意事项:+ N7 k5 A/ p, t% e" ^
1.做好准备工作,预热培养基,超净台的紫外照射等。9 g( {& W1 P; o+ Y: N
2.细胞从液氮罐拿出来,防止被液氮冻伤。快速地用手揉搓10次左右,迅速进行37度------40度水浴锅解冻复苏,速度要快。并且在解冻过程中有规律地小心摇动冻存管以加速解冻过程。
! g- G m# V) n& q. y& {& l# a3.将冻存液转移至无菌的15ml离心管,用预热好的培养基中和,稀释DMSO,速度慢的话很容易造成细胞活率低。随后离心,弃掉上清。% l. e3 S$ X- ^0 T6 w# E
4.对于大多数类型细胞的复苏,待其大部分贴壁后即可更换新鲜的培养基。" S. H% t2 I8 s# r$ {# G
5.对于特定类型的细胞,在复苏过程中还要添加有助于细胞存活以及成克隆的小分子试剂(比如Y-27632等)。8 W/ K$ T' ]3 P5 V' o6 f% w
6.另外在细胞复苏过程中,将细胞接种到提前(明胶等)包被好的培养皿上,也有助于提高细胞的存活率。
7 S K! Y6 y+ F# S' v7 I7.还有一种情况是你在细胞冻存过程中,出现了问题。导致细胞在细胞冻存过程中的活力接降低了很多。
, [; }3 ^# t1 t9 i- i希望以上的分析能帮助到你,祝好! |
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