脐血单个核细胞分离培养请教

wuxiao101325

我想分离培养脐血单个核细胞，请问我该使用哪个离体时间段的样本来分离最好？

lili9999

分离培养原代细胞，最好是离体时间越少越好，细胞状态才好。但我觉得最好还是要用细胞分离液分离纯化细胞比较好。里面的红细胞实在是太多，还有好多间质细胞，如果一起养以后分离起来比较麻烦。但不知你还有什么要求。

wuxiao101325

我也知道离体时间越短越好，但是我们实验室没有采集资格，必须跟医院联系，但我又不想在工作时间以外去拿样本来培养，比如医院在头一天晚上就采集好样本了，我第二天一早去拿来培养行不？如果不行我就不要了，只等新鲜的样本，要养不出来不就白花钱了

get0715

第二天分离出来的细胞活性明显降低，如果说做基础研究，需要对刚分离出来的细胞进行计数，这样的数据你就不能用了，说明不了任何问题。再有细胞质量不好，你做试验的风险肯定就增大，不是每次都能做出结果，那样不是更浪费试剂么，那些也是钱啊。如果是预实验建议花钱取新鲜的标本。

wuxiao101325

非常感谢热心胞友们的建议！

xbs530515

实际上，你完全可以做一次试试看，但应该在低温保存，在4度冰箱存放，注意必须加入抗凝剂，一般是枸橼酸盐，肝素之类。个人觉得放10多个小时应该问题不大。一般献血的全血不是还可以保持2，30天嘛

山风

用脐血4度保存超过10个小时后，提出的单核细胞非常少，而且细胞状态特别差，最好是六七个小时之内的，这样单核细胞多，而且细胞状态特别好。

louise33

Actually in my laboratory, we are using the cord blood collected within 24 hours. The cord blood is kept at 4C in the refrigerator after collection and works quite fine.   f; A  |  D5 ^7 G
Since CD34+ cells obtained from 1 donor is not much, we usually pool the cells from different donors together after using lymphoprep to deplet polynuclear cells.
. B% K& q1 S0 ^: E& B# w1 LIt is very common to freeze cord blood cells for storage by cryopreservation, as always be mentioned in the publication. However, for myself, I will use fresh cells for doing functional assays, because usually I will have higher yield after sorting