无饲养层小鼠胚胎干细胞培养

zhbshi998

有谁做过无饲养层小鼠胚胎干细胞培养的，是不是就是其他条件一样，把那个LIF因子的浓度提高就行了，还是有其他的不同呢

懵懂干细胞

http://www.doc88.com/p-77084513674.html8 v: i0 f8 g* ?- c& ~) W  I# Q7 B
这里面有篇文献你参考参考！
1 ^* E" w+ ]( r4 C7 n; k" j我们实验室一直都用MEF做饲养层来培养胚胎干细胞的！
( @$ G5 {; o# l5 E$ k! H- p: W无饲养层培养体系在我们实验还只是听说，目前应该还没建成该体系！( V; m7 e1 k7 |
以后你要是摸索出来了protocol，还请赐教啊朋友！

上海过客

需要 经过 驯化   来培养  ，现在 已经有一些 无饲养层 培养的 Mouse ES 细胞系 。3 L: J, q+ {! s  I' }1 W& P$ F7 ?

9 f8 [  ^0 o4 y5 v. w小鼠胚胎操作指南 里  提到 这个问题 。  请搜索 以下 我的 帖子 ，里面有具体的 页码

foudre

我不知道你的饲养曾指的是MEF细胞还是一些铺被的东西。我们实验室用的是0.1%明胶铺被的培养皿来养ES细胞的~~  LIF的浓度与有MEF细胞时候没有变化.

shuiping2008

我不知道你的饲养曾指的是MEF细胞还是一些铺被的东西。我们实验室用的是0.1%明胶铺被的培养皿来养ES细胞的~ ...0 k8 @. C) b* _% M/ V* K5 D
foudre 发表于 2010-9-4 10:00

; M% p! r6 i8 A

0 p# y7 d. v5 {$ X
9 {% L/ m8 d, X7 T& `  O. w7 m  {    你们培养的细胞通常做哪些用途?

foudre

你们培养的细胞通常做哪些用途?# I8 r& ^' ]6 b
shuiping2008 发表于 2010-9-5 15:42

; H+ |; a* v7 c# {

( c5 d3 }/ r6 p/ M6 F/ D我们主要是做分化的，诱导ES细胞分化。

fespysok

我们实验室养的就是无饲养层的小鼠胚胎干细胞CGR8，0.1%明胶铺板，1000U/ml LIF，其他的都一样了！

supergama

个人感觉小鼠胚胎干细胞的无饲养层培养较人的胚胎干细胞的无饲养层培养容易，matrigel可以不用，明胶最好是有，LIF浓度不提高也没关系，关键是细胞密度要控制好不能太低，一般ES集落边缘的细胞会有一定程度的分化，但这些分化的细胞能进一步支持集落中央细胞的自我更新。短期的无饲养层培养mES是实验室的常用技术，长期维持mES于无饲养层培养体系下文献支持不够。

zhbshi998

个人感觉小鼠胚胎干细胞的无饲养层培养较人的胚胎干细胞的无饲养层培养容易，matrigel可以不用，明胶最好是 ...2 T5 J: ]. Q2 C2 R8 [: I! C
supergama 发表于 2010-9-9 13:20

# w" Y7 \  ~. h7 Y2 o# }9 h
你们不用饲养层，LIF浓度也没变化，那干细胞不会分化很严重吧，你们用饲养层时LIF用的是多大的浓度啊?

上海过客

无饲养层 培养 小鼠的 ＥＳ细胞　给我的感觉　张脚的　不一定是分化细胞　。5 g$ I9 v0 ~: C  I- s/ F

6 k5 T" f7 m' N9 q我个人感觉　，　细胞一定要吹打成单细胞　，种的时候一定要　均匀，不能有聚集　。+ \( j5 L5 h1 v0 q$ N! ~! e
2 @2 X9 t' _$ l' X; `
传代一定要快