求助：小鼠体外受精

xmliuj

请问做小鼠体外受精，有几个问题需要请教：
: ^' s4 y) K7 u/ D1 L1 r1.精子取出后在HTF获能需要多长时间？一个小时吗？
: G% g$ q- ~) J9 a  `2.卵丘复合体需要用透明质酸酶处理吗？; J5 }: ?$ o- Z! |
3.卵丘复合体取出后立即放在获能的精子里受精还是卵子也需要成熟一个小时再放在获能的精子里呢？- i* x" ?& d2 i/ ?
4.是把精子放在卵丘复合体中呢还是加卵丘复合体在精子液滴里呢？/ }2 m3 P6 O6 ~) t3 W% V8 G% ^
谢谢大家了。

healthlicn

精子取出后在HTF获能需要一个小时.即37.6摄氏度,5%CO2培养一小时。卵丘复合体不需要用透明质酸酶处理，但是卵子要体外培养2小时，即37.6摄氏度,5%CO2二小时，这时候在卵子大部已GVBD。算好时间，等两者时间都够了然后把精子液滴加入有卵子的液滴中。

xmliuj

精子取出后在HTF获能需要一个小时.即37.6摄氏度,5%CO2培养一小时。卵丘复合体不需要用透明质酸酶处理，但是 ...
5 z3 I: O1 S+ C4 b, Z6 ohealthlicn 发表于 2010-9-18 20:09

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怎么资料上从来没有看到过卵丘复合体需要在体外成熟两个小时才能受精的？资料上都是说卵丘复合体取出后即可以与精子进行体外受精，卵丘复合体是12-14h post-hCG取出，体外成熟2h，这是必须的嘛？非常感谢

chiangmax

回复 2# healthlicn
9 z' \! w4 g/ T但是卵子要体外培养2小时，即37.6摄氏度,5%CO2二小时，这时候在卵子大部已GVBD
. v# H. `  Q: e- d9 i" y5 o% ^2 S8 F* w  l% |( O- @1 |* Y
请问你知道什么时候发生GVBD吗？多看看书

xmliuj

请问大家的HTF中BSA的浓度是多少？我的是4g/L，这个浓度适合精子获能和受精吗？

cambridge2009

新鲜精子取出后在HTF获能需要1-2个小时， 即37摄氏度,5%CO2培养1-2小时。在HCG之后13-16个小时之内杀雌鼠取出卵丘复合体, 直接放入受精滴,不需要用透明质酸酶处理。BSA 浓度3mg/ml 就很好。这个浓度均适合精子获能和受精。注意试剂和水的质量，IVF是很好做的。

djj01

精子体外获能需一小时左右，关键是控制好生长环境！

xmliuj

精子体外获能需一小时左右，关键是控制好生长环境！' E: x" E# g% X7 k4 M6 M
djj01 发表于 2010-10-20 20:51

: b& o$ ?8 g2 F. L$ |
/ p& S3 x& i0 D! T+ F- k您说的生长环境是指培养箱的环境，还是另外的其它需要注意的环境呢？