脂肪间充质细胞消化、收集的问题

swtarron

最近刚开始做脂肪间充质，脂肪来源为吸脂来源的。消化的时候用0.25%的胰酶消化，发现不是很容易消化，消化6-8min，消化效果也不是很好，还有大家一般T75和T225的长满的一般能收集多少细胞啊？求解答。

田甜

亲，不都是用胶原酶消化的吗？很少用胰酶吧。

swtarron

回复 田甜 的帖子
9 x* J5 `; _* r: T: U
5 s* ^: `9 k9 |: f, I( o可能没有表达清楚，我是说传代之后，冻存细胞前，把细胞从培养瓶瓶壁上消化下来的时候

田甜

回复 swtarron 的帖子8 u  A, ^' W, P. e4 ]
0 E8 U: O# v* S3 p1 y0 w  S
哦，我理解错误。
1 O4 n, y8 B, p, U9 @原代本来就不好消化一下，PBS润洗，去除残留血清培养基。不知道你的胰酶里面是否加有EDTA，一般0.25%胰酶-0.05%EDTA，这种组合好像对绝大多数细胞效果都还可以，要是还是很难消化，放培养箱，37℃消化。: K5 ~/ R# G6 A6 [, _/ f) b
我这边做过原代，差不多80%汇合度的时候，原代消化每T75可收150万左右的细胞。: ^% F$ S3 a, c# R( F6 G

奇幻雪蓝

swtarron

回复 田甜 的帖子
: {9 N9 d, D; a$ n, n
% \* G  @9 N2 o$ f你传代之后P2或者P3能收多少细胞啊

田甜

不知道你说的人的还是大鼠的，或是其它来源的。' O: @8 s3 z' x  ~) C  X/ z2 h. i
我这边就猴子的脂肪干细胞计数过，P2、P3一般情况是300万-400万。主要是看培养条件吧，细胞状态好的时候就能收怎么多。

swtarron

回复 田甜 的帖子/ j) Y3 q& E3 ~* ~: h0 [* g
4 x. k" q/ p+ u' a
是人脂肪来源的，你是一个T75收集到300万-400万？

田甜

回复 swtarron 的帖子* @. Z, Q/ h) r2 @. m0 @

: M, T) ?4 l/ F: v  ^今天收了一个人的P1代，一瓶T75收了约400万。培养基用的是无血清培养基，专门养间充质干细胞的。

swtarron

" p. C) C6 B3 P9 R0 w9 W3 Z* _
5 o8 _) R0 D" Y, X' L
回复 田甜 的帖子
% T( Y$ v: R- Z% i: J3 R" R' d  T' n4 Z* w9 M& e6 w% X
是脂肪间充质吧？话说我们做流式貌似脂肪间充质要比脐带间充质细胞大一些。那应该长满了吧，你们收集细胞的时候用的胰酶和EDTA嘛，消化时间大概多久，和脐带间充质消化相比难易程度如何？我上次一个T75长到80%融合度，消化收集后用输血器过滤计数只有250万左右，为什么我的这么少啊？