慢病毒感染人的间充质干细胞技术交流

yeshch

各位家友好！最近在准备慢病毒感染人的间充质干细胞（MSC）的实验，打算通过Lenti-virus对MSC进行基因的稳转过表达，恳请有经验的家友分享相关经验：, M8 w  R  l+ A
1. 常用的MOI是多少？
: Y% Q" `% [4 _1 r' x4 e2. 如何感染效率更高？
* b; ^+ B" N. s  d3. MSC的接种以及长到什么密度适合感染？
3 H/ V5 j7 k/ t8 P4. 感染最佳时长？
' f2 `1 _6 @( H! r) B, y7 J5. 感染后细胞状态怎样？是否会影响增殖，感染后能够继续传代培养几代？
8 W: V, ^0 w4 {& P······提供经验分享或者相关资料9·8·5·3·4·0·2·6·2·@·q`q.c`o`m都可以哈！提前谢谢各位家友啦！

fm100200

生长融合80%左右，24h-48h，会影响细胞增殖

yeshch

没人理就自己顶个贴咯，快来人呢

liuyasi2008

细胞密度50%-70%；MOI值50-100；感染时高浓度病毒孵育细胞，过夜感染，换液；感染后一般不影响状态。

yeshch

回复 liuyasi2008 的帖子0 o" S* z% j3 m

2 B* S4 W+ @" W' v/ G4 ?; V. C谢谢，但是moi这么高细胞状态不会受影响？请问您有没有数据支持呢，或者发表的文章？

yeshch

回复 fm100200 的帖子( A4 q! M2 i8 ]; }6 d/ K6 N
+ G. ~' Q, m9 X6 c# E6 ?
Thanks♪(･ω･)ﾉ

liuyasi2008

感染过这个细胞，感染效率80%以上，传了一次代，收细胞做了PCR检测。可以感染2-3个梯度孔。10，30，50.根据感染效果再调整。

yeshch

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% ~. M) R: h" i* y% o! x! B  d9 x; W
Thanks♪(･ω･)ﾉ时间紧任务重没有时间预实验了

yeshch

病毒倒是感染上了，也能看到GFP，但是细胞基本不扩增，传代之后也长不起来怎么回事啊（未感染的对照组长得很好）？有没有做过的前辈传授一下经验啊？感染前后的传代密度，培养基什么的有什么特殊要求吗？

ielisa

和我当时的实验有点像啊，也是细胞不长，还有挂掉的~~~