慢病毒感染人的间充质干细胞技术交流

yeshch

各位家友好！最近在准备慢病毒感染人的间充质干细胞（MSC）的实验，打算通过Lenti-virus对MSC进行基因的稳转过表达，恳请有经验的家友分享相关经验：; w# z2 W+ P) y5 Q$ I; ^5 ~. c/ J
1. 常用的MOI是多少？" u) \9 t9 u8 u9 I9 @( r$ k+ u
2. 如何感染效率更高？* z# z6 Q7 s" \) {# y
3. MSC的接种以及长到什么密度适合感染？. p/ I3 C2 d0 F; p
4. 感染最佳时长？* z1 q. j1 f. V/ Y. M
5. 感染后细胞状态怎样？是否会影响增殖，感染后能够继续传代培养几代？5 j" E8 j+ b9 Z2 Q% d% r$ u
······提供经验分享或者相关资料9·8·5·3·4·0·2·6·2·@·q`q.c`o`m都可以哈！提前谢谢各位家友啦！

fm100200

生长融合80%左右，24h-48h，会影响细胞增殖

yeshch

没人理就自己顶个贴咯，快来人呢

liuyasi2008

细胞密度50%-70%；MOI值50-100；感染时高浓度病毒孵育细胞，过夜感染，换液；感染后一般不影响状态。

yeshch

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' T. F8 r9 I  Y0 v; T8 ~1 H谢谢，但是moi这么高细胞状态不会受影响？请问您有没有数据支持呢，或者发表的文章？

yeshch

回复 fm100200 的帖子# |8 a" I* X+ D$ i! Y

% [- j4 l- w# H  y1 a- kThanks♪(･ω･)ﾉ

liuyasi2008

感染过这个细胞，感染效率80%以上，传了一次代，收细胞做了PCR检测。可以感染2-3个梯度孔。10，30，50.根据感染效果再调整。

yeshch

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0 I8 N( N3 W9 M1 K6 j6 j3 m+ ?/ ^0 l2 l- |2 k
Thanks♪(･ω･)ﾉ时间紧任务重没有时间预实验了

yeshch

病毒倒是感染上了，也能看到GFP，但是细胞基本不扩增，传代之后也长不起来怎么回事啊（未感染的对照组长得很好）？有没有做过的前辈传授一下经验啊？感染前后的传代密度，培养基什么的有什么特殊要求吗？

ielisa

和我当时的实验有点像啊，也是细胞不长，还有挂掉的~~~