求助:鼠胚胎干细胞容易分化是怎么回事

chliu

一种可能是细胞本身不好，有分化倾向4 N3 ]4 |! r6 o$ W6 ]
另一方面，饲养层要分布均匀，状态好，铺满，最好多一些，密一些。

yangpan521

回复 干细胞狂想 的帖子
3 q, o5 w0 c7 H& q0 L/ V3 S! b
3 N. R# j2 ]( s4 E/ S2 x文献只是参考而已，但实际还要看细胞的状态，我们实验室养小鼠的胚胎干细胞就用，DMEM + 2mM 谷氨酰胺 (Gibco) + 2mM丙酮酸钠（Gibco) + 1%非必须氨基酸(Gibco) + 0.1 mM β-巯基乙醇+ 1000U/mL LIF (ESGRO, Chemicon International) + 10% FBS（Hyclone澳大利亚原装进口，Cat No. SH30084.03) + 1%青链霉素 (Gibco)。效果很好，但用KSR却不能达到相应的效果。

hibino

1. 不要用血清，用KSR 或者N2+B27（GIBCO）。因为血清的批次之间有差异的1 K* P4 w8 [# ]
2. 不同细胞系的培养条件不一样的，如E14可以用LIF培养，B6必须用LIF加CHIR99021.请告知您的ES的品系
; v6 E& u" G$ l( [/ E3.L-G 请换为gulamax（GIBCO），稳定性极佳也不贵。我吃过L-G的亏浪费了整整半年时间，L-G最好是现用现配，4度时降解速度是按天算的。
# R# ]: L# g, p! e  P其他楼下补充

meiying3061

干细胞的状态饲养层是最重要的，密度不能希也不能过密；
! X" [; j  |! B% k8 b+ y此外传代时间也很重要，我一般隔2天传代一次，如果再多长一天就会出现楼主说的情况；' \9 b, N+ J1 e- t( e3 H- [9 [/ c
我的培养体系用的是15%的gibco 的ES级胎牛，GIBCO的ko-dmem，其他都差不多，总之血清也很重要

yaner

传代时接种希一些试试

lhw7514093

一般在48小时内就要传代的，培养时间过长而不传代很可能会分化

zhusealin

跟血清和饲养层状态有关，血清要用ES级别的

sarah19860420

通过最近看论坛里的帖子，觉得楼主最有可能存在的问题就是血清和饲养层了。

sarah19860420

我们这里培养胚胎干细胞以及IPS是选择用血清替代物的。其他的使用血清

sarah19860420

我们这里培养胚胎干细胞以及IPS是选择用血清替代物的。其他的使用血清