急，急，急！油红O染色？

841961279

请问有谁做过油红O染色啊，稀释液怎么配呢，我用双蒸水3:2配的，静置10分钟后出现分层，然后混匀后进行染色，避光孵育15分钟后，油层已帖服平皿低，根本就下不掉啊，求解！？？？

tjbone

油红O脂类染色法  w* \3 E: E! r2 R, y& C( z" c% f7 v

8 z/ K! \' \8 t2 }* v0 y    油红O属于偶氮染料，是很强的脂溶剂和染脂剂，与甘油三酯结合呈小脂滴状。脂溶性染料能溶于组织和细胞中的脂类，它在脂类中的溶解度比在溶剂中大。当组织切片置人染液时，染料则离开染液而溶于组织内的脂质(如脂滴)中，使组织内的脂滴呈橘红色。
& P  J8 O, H9 b' }
4 ^5 l# }$ \3 N+ n- a+ o* ?    （一）油红O染液的配制
( I. O5 R/ S4 }  a    1．油红O    1g
4 m) m4 W) z% X# j5 s5 q       异丙醇    lOOml
  Q: p! |3 ~0 |5 V4 n% x    2．油红O    足量/ u9 ~# S3 Q& A
       异丙醇    lOOml! |; `7 y5 s$ v" H9 p
    配成油红O饱和溶液，使用时以油红O饱和液一份加蒸馏水两份，过滤后使用。: Y6 _7 ~7 F% d' s, p
% w1 y9 g. Y0 h
    （二）染色程序
2 @) X, z4 p0 y# E$ S" j' x& X    1．切片用甲醛—钙固定10分钟；6 K3 {1 @4 U9 D( t
    2．蒸馏水洗；1 U' J4 M. O1 p- S& m4 h
    3．60％异丙醇浸洗；# P/ U( z8 M4 T# q9 Z, p$ o- H
    4．1由红O染液10分钟(染液可回收再利用)；
0 T' k. s4 r3 p0 E5 L    5． 60％异丙醇分色至背景五色；
. v( o; t6 R/ M) O) _/ ]. D+ q    6．蒸馏水洗；
7 s) u, E: b5 Q% m+ K! I3 f& B    7．Mayer苏木精复染；4 d+ C2 C8 t7 R: c
    8．自来水洗(蓝化)1～3分钟；) g" F$ ~. J! ^9 e8 x' x
    9．蒸馏水洗；
: m$ J  q' G% j0 {    10．甘油明胶封片。
8 w) ^( `+ P  ^- T7 d7 d4 v! A% s, x& b ! c3 K5 h. V2 f7 W$ N+ X& G& {
    结果：组织细胞中脂滴呈橘红色，核呈蓝色。
& E6 |) P( S! j' k( R

tjbone

油红O脂类染色法+ z% E3 Y4 a. [; `) i

8 C* R- E3 i9 E9 }! X    油红O属于偶氮染料，是很强的脂溶剂和染脂剂，与甘油三酯结合呈小脂滴状。脂溶性染料能溶于组织和细胞中的脂类，它在脂类中的溶解度比在溶剂中大。当组织切片置人染液时，染料则离开染液而溶于组织内的脂质(如脂滴)中，使组织内的脂滴呈橘红色。
) e0 `1 l) K3 T- t $ n% D( ?1 @: E/ I# l2 I8 R( [% ~2 I+ \
    （一）油红O染液的配制
7 d$ Q5 t# I' P, ?' E# E) g* Q    1．油红O    1g" E6 ^. F% A# l' n! F
       异丙醇    lOOml
# o: z  D" R# \9 F    2．油红O    足量0 r- Q' v0 s$ I' i
       异丙醇    lOOml
7 f" N" a; h; X/ `    配成油红O饱和溶液，使用时以油红O饱和液一份加蒸馏水两份，过滤后使用。
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    （二）染色程序
9 K* w: M5 A: M# L. E/ T    1．切片用甲醛—钙固定10分钟；% X8 G1 e: V5 @8 t' H
    2．蒸馏水洗；
1 \1 j7 e* ]/ u0 M& K    3．60％异丙醇浸洗；
+ a' R  b/ Z% }: G- h. Z) e) ]    4．1由红O染液10分钟(染液可回收再利用)；
( L: B' c, S) b3 y5 C. a    5． 60％异丙醇分色至背景五色；
! A" ]  N2 r7 z9 {) O/ e' u    6．蒸馏水洗；
" B/ N. v# v: [; ^    7．Mayer苏木精复染；
! M  ?0 }" \% Y4 ^( V# x    8．自来水洗(蓝化)1～3分钟；5 b0 y5 k  O$ b  D' i' s( M' J
    9．蒸馏水洗；
% F/ w2 C8 X: }& W& t% p    10．甘油明胶封片。, t6 ]4 {1 P2 j/ A' z7 d

8 R/ @5 n0 t7 x$ T    结果：组织细胞中脂滴呈橘红色，核呈蓝色。
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ljzmy82

配好之后，需要过滤一下，才能用这样效果较好些，我的实验都是这样做的

841961279

我也是过滤后用的，染完后就一层红色的油层粘附瓶底，生理盐水根本就洗不掉的
. R7 T0 i6 W/ U. l' U) m4 n: Y$ E

841961279

请问 ，2个步骤中60％异丙醇分别作用多久啊
( [9 g+ }# Z) n% g6 m& H0 T6 t! {

zerollx

( A! H! {; W0 H5 b; g. h1 b

9 G$ v& p% c: I$ w- `油红-O染料：3 h0 c8 ^% D7 P& O1 J6 S# ]0 g
               储液：0.7g油红-O溶解在200ml的异丙醇中，0.2um滤器过滤（除去沉淀），室温储存。. u6 z9 i# T6 Y+ ?$ x
              工作液：配成上述浓度60%的浓度，即加30ml储液，20ml蒸馏水，混匀，室温放置30min，若有眼见的沉淀物，可再次过滤，24h内使用。0 O% k# P- {% s- @# G
0 |1 Q0 D( P5 T3 i8 p& G# ~

# @9 y1 e& n$ U/ x+ s
! \0 Y, L* ]/ e  O染色：5 F! n* t; [/ {( h
        固定：弃去培养基，DPBS洗涤，4%多聚甲醛固定15min，弃去固定液，DPBS洗涤（此步后可在4度保存数月）
& o4 ?2 r9 g1 o- Y9 j5 k- [0 t              染色：六孔板中每孔加2ml油红-O染料，室温孵育20~60min。5 N' g% y3 o8 |* |  |
        脱色：用2ml DPBS洗涤直至背景色干净，注意一定要洗干净（不要加太多的DPBS洗涤，否则会将染料浮起得更高将皿壁也染上），有效的洗完之后，加入2ml的DPBS,倒置显微镜下观察。7 U' Y, M& m2 p# P  J
       
& Z) Y/ i7 e" Z3 ?+ @
# `4 n2 |  l1 t7 J此法亲自使用，百试不爽！

zerollx

回复 841961279 的帖子9 u& T0 i" g9 e
, Q3 \1 V9 J1 g* q( E
从液面表面吸取洗涤液，而不是将枪头插到液面下，因为油是漂着的，反复操作直至干净，当然想要完全洗干净是不可能的，只是尽可能的去除，洗完后再加DPBS，将残留的少量染料悬浮于液面，这样就不会影响你皿底细胞的观察了，祝实验顺利……

841961279

我过滤了2次后，仍然会出现上面的水层、中间的鲜红层、下面的黑乎乎沉淀，那染色时使用的应该是中间鲜红的那层吗