斑马鱼胚胎显微注射（QT格式）

珊野love

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8 f5 z; t0 n% B9 a8 v; Z1 f楼主能不能发给我一份啊，等级太低下不了，谢谢了，邮箱taoran0227@163.com

ying

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# M% v; R' i9 s; z7 D2 G我一般打1-2nL.   注射针我们是在鱼房做的，他们有个拉针的机器，我不知道他们怎么设置的参数。针也有不同类型的，你是要打算自己买自己手工拉吗？
# r9 F; s6 d6 Z; j3 {/ R1 r我打动物极的方法是，先把鱼卵在琼脂板上（那种特制的带有凹槽的那种，你知道的）排好，然后用个拉过的枪头（火烧一下，化了之后一拉，拉成不粗不细的一根丝丝）一个一个拨，拨得动物极朝上。然后再打的。之所以要用拉过的枪头来拨，是因为比较软不容易刺穿卵，又比较长容易操控。
; Q. K; d6 m  Q! A( f话说，你如果不是做转基因鱼，而是仅仅是打morpholino或者合成的mRNA或者类似的小分子，是不必要打动物极的，任何一个角度打了，尽量往卵的正中间插，打了就行了。1 _7 c) N  \* E: X9 j
在卵产出后10-20分钟，动物极一侧是透明的，另一侧是卵黄，很容易看见的。如果看不见，稍微把卵拨一下换个角度就可以看见。一般正常情况下，动物极是自然朝上的，所以拨一下就能看见。在45分钟之后，动物极就开始分裂了，就更容易找到了。
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ying

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0 j3 ]# b$ R/ H3 Q4 n- S9 z2 u注射mRNA一般可以打400-800pg每个卵，注射morpholino一般是4ng-8ng。多了会有非特异性的表型。

珊野love

非常谢谢，我是做转基因的，第一批检测结果就是没有转进去，当时因为找不到动物极就直接扎到卵黄中间的位置了，因为放在培养皿上没有水，卵还很小，所以看不到动物极，你说的琼脂糖的那个孔是胶孔还是有特殊的专门显微注射的那种啊~~

珊野love

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) t0 W& l) x* w+ o! d
; l! B# M5 A8 J5 y3 ^7 C3 f注射针我们也是用拉针仪拉的，里面也有好多程序，但是不知道哪个好，有的特别细都打不出来液体~~

ying

回复 珊野love 的帖子0 I2 B) R& y( _
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话说，你是用的体视显微镜操作么？体视显微镜下面看，是一定可以看到的啊。卵再小，倍数调高了也是很大很大的啊。不用体视显微镜估计没人能注射到动物极吧～$ P" S+ D/ I1 B- q- B6 R
琼脂糖板子是有个专门的模具，模具扣到琼脂糖上面，凝固之后就成了几排槽子了。你是上海的吗？是的话我的可以借你先用。
* R* m# E$ c% N6 c/ T: v我也不知道拉针是用什么程序。你可以询问一下清华（？）的孟安民组或者神经所的杜久林组，或者生化所的李逸平组，他们的程序是怎么设置的。你也可以按照各种程序都试试，然后选一个好用的嘛。

珊野love

回复 ying 的帖子6 Y! \* j9 E$ N* U3 f
% B  H) n' k9 y' f
非常感谢，我们用的就是专门显微注射的显微镜，我不知道是不是体式的，老师说找不到动物极，因为培养皿中没有谁，没法漂浮。我原来在上海那边，那边有好多同学，不过现在来哈尔滨啦，嘿嘿，离你们好远呀~~

lizzychen

回复 jdrkna 的帖子# m" a) q- q" Y: c. Z* U$ a
% H" y* u. t) `8 l' |* m
在做这个，但是级别低了下载不了，麻烦LZ给我发一份吧，谢谢哈！174499907@qq.com

lizzychen

楼主，你好，想问下你一般每个卵打多少量？定量你是用mineral oil测量液滴的直径么？期待回复，谢谢！

runsong

回复 jdrkna 的帖子2 W& D6 |3 |' i7 Q) n( k$ ^

- |: B6 V; M- P$ p3 ]$ K$ ~我这里网速太慢了。请传一份
% U! j, j5 |$ G5 m4 p2 r5595758@163.com