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momocy

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金话筒优秀会员美女研究员

楼主

发表于 2012-5-18 09:26 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

我想要敲低（shRNA）或者过表达hES细胞里面的基因，想问用什么转染试剂比较好？大侠们可有protocol？

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沙发

发表于 2012-5-19 14:52 |只看该作者

人胚胎干细胞很顽固，现有的商品化的转染试剂对它的效果都不好。现在比较常用的就是用逆转录病毒或者慢病毒去感染。再就是使用amaxa核转仪，但细胞死亡会很多，核转没有标准的protocol，得要自己去摸索。然后就是你做质粒的时候注意启动子的使用。有些常用的质粒上面的启动子，不一定会被hESC识别；有的时候转进去可能会有点效果，但不知怎么原因，转进去的启动子就沉默了。