关于台盼蓝染色的浓度及时间 - 实验室综合讨论区干细胞之家



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新手上路

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楼主

发表于 2012-7-14 17:07 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

刚刚接触干细胞，菜鸟问题还望各位大侠帮忙解惑~~~~~~

* {" E$ R5 e- b3 T
1、染色浓度：我用的是Gibco的0.4%的台盼蓝，1:1加入，这样的量高不高呢？我看到有很多人都是用的1:9的量。效果好不好？+ {& i. ~( \+ y$ A; y7 F" T. W& W
2、染色时间：我通常是混合了就加在血球计数板上，发现2分钟、3分钟、很快细胞就出现死亡增多的情况，例如2分钟 10%死亡，5分钟50%死亡。不知道这样的情况是否正常呢？如果都是这样，那么应该在几分钟时计数最为准确呢？
抱拳~~望大侠们不吝赐教

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沙发

发表于 2012-7-15 08:51 |只看该作者

本帖最后由 cocoslee 于 2012-7-15 08:57 编辑 6 S* V7 p n$ l L1 [. S5 Q# u$ c0 O

1.浓度是：1:9，即台盼蓝的终浓度是0.04%；
2.我的做法是，混匀后放到计数板上，显微镜照相下来，整个过程在3min之内完成然后计数；如果没有照相系统，就得3min之内数完。
祝你好运！

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藤椅

发表于 2012-7-15 09:08 |只看该作者

回答1：如果你买的是台盼蓝0.4%浓度的成品，1:9和细胞悬液的配比没有问题，我们就是这样做的，浓度上没有问题，不同的是我们的台盼蓝是自己配制的，先配置成4%的储存液，用时再1:9稀释为工作液。然后90uL的细胞悬液+10UL的染液。不知道你买的成品用不用过滤，我们自己配的是一定要定性滤纸过滤的。2 E1 J7 g, V# u) {' J0 [
2：台盼蓝混进细胞悬液之后，轻轻混匀1分钟，3分钟之内开始计数，我们的作法是怕混不均匀，就用EP管的下边轻碰一下小振荡器，混匀后就开始计数了，破裂的均匀蓝就是死细胞，未着色的就是待计数的细胞。注意：台盼蓝染细胞时候不能时间过长，不然活细胞也会着色，干扰计数。' H# Q1 l; J) ]; F/ z
自己的经验不知正确与否，还请后来高人多修正。