卵母细胞激活时6DMAP的配制

lmh_yixue

我在用Ca +6DMAP法激活卵母细胞，请问6DMAP是之前师姐配好的100mM放在-20℃保存的。为什么融化后6DMAP没有溶解？常温吹打后也没有溶解。师姐的配方是：6-DMAP 100mg +" x8 G7 ]9 G% Z7 o1 F
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超纯水 6.128ml 。请问6D的溶解度是多少，进一步稀释成5mM的应该怎么处理？

文文2012

6-DMAP微量配制浓度太大，很难溶解的，最好用DMSO配制或工作液时候再配制

BenHantun

我们用来激活牛卵，终浓度配成2mM， 用DMSO先配成100*或者1000*，使用时再稀释，" b$ u6 M2 G" n7 Z
配制100*方法：0.0163g 6-D溶于0.5ml的DMSO中，最好配的浓度大一些，这样用的DMSO就少，对卵母细胞损伤小。

lmh_yixue

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非常感谢，我的师姐（已经毕业）保存在-20℃的是100*的，终浓度是2mM.她的论文里写的是用超纯水 6.128ml+6-DMAP 100mg 。但是我发现6DMAP根本就没有溶解。后面是用1026来稀释成2mM的。我每次把卵细胞放到2mM的6DMAP中都发现卵细胞有皱缩现象，之后放到1026中就缓慢的变好了。是激活时本来就是这种现象呢还是6DMAP有问题？如果按照你说的方法，那么开始的100*应该用DMSO配制才可以对吗？

lmh_yixue

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非常感谢！！请问工作液时再配制是怎么做呢？我的师姐（已经毕业）保存在-20℃的是100*的，是用超纯水 6.128ml+6-DMAP 100mg配成的 。但是我发现6DMAP根本就没有溶解。后面是用1026来稀释成2mM的。工作液是不是就是后来我用1026来稀释所得的？

BenHantun

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# Q  U, l2 Z' C' d+ L4 W" ]8 M! G, d2 x2 w$ b( _
浓储液用DMSO配置，最后用发育液稀释至终浓度

lmh_yixue

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2 ]+ p; d( t5 P7 r" Z  o1 _回复 BenHantun 的帖子
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请问你用A23187吗？A23187有“钙离子载体A23187”，和“A23187（钙镁混合盐）”应该用哪一种？这两种分子量不同。可以告诉我你用的是哪个公司的吗？还有货号

BenHantun

我们用的是离子霉素（Ionomycin from Streptomyces conglobatus，Sigma  I9657）
8 X  N  j& y# S/ Y没用过钙离子载体。

lmh_yixue

回复 BenHantun 的帖子& }( `) K+ N" j* _  `! z1 t
# H$ C6 y7 t$ p. c) d
Thank you so much