2i培养出现问题

zhangliqin

用2i培养mES时，刚开始细胞复苏起来可以贴壁，且长的还行，但是长到第三天之后，克隆开始大量飘起来，之后传代，细胞就不贴壁了，这是怎么回事呢？

bj123456

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* F6 Z5 |$ ]8 L/ [+ q' f! @7 ~
5 l: D8 m1 g3 A; [1 B2 K用2i培养基培养就是这样，不含血清，克隆非常容易飘。但是传代之后应该还会贴壁的。

褚cell

检测下细胞有没有污染

romanyuo

是否是在进行贴壁筛选，浮起来的不是你所需的细胞！就像MSC全髓培养，不用淋巴细胞分离液，培养基进行筛选，贴壁的才是所需细胞。

genedu

按照应启龙最早使用2i培养体系，他认为飘起来的细胞都是干性比较好的细胞，特别是在养大鼠的ES或者iPS细胞时，您就会发现，飘起来的细胞在干性检测或者说后期的基因修饰上，都是占优的，只不过在传代过程中比较麻烦。所以说恭喜楼主，您的细胞不错

zhangliqin

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3 ^/ v6 n3 `. m6 j  e: g+ G( Q9 n( \4 k% I6 o
好像不是这样的，我觉得我的细胞好像在培养过程中死了，不然传代后应该是可以贴壁的，现在还没有找到原因。。。

zhangliqin

回复 bj123456 的帖子+ h  J2 L/ R8 ^: y4 `

4 B2 t) N8 V0 C所以是不是细胞已经死了才会这样子，现在都还不知道是怎么回事，想再培养一次看看

zhangliqin

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但是在血清培养条件下不会出现这样的问题，所以不应该是细胞污染吧？实验室刚开始养细胞，没有检测污染的试剂盒，请问你们都是用什么KIT检测呢？

genedu

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7 w4 D0 W$ N5 M# O: t
. L* m8 ?- p- w+ Q你的细胞飘起来的时候的时候是单个细胞呢？还是克隆状？如果有图的话，发个过来大家瞧瞧

zhangliqin

回复 genedu 的帖子3 |- B: A: }; @1 j
1 F) G" P3 K; S1 L  o8 Q
是整个克隆飘起来，上次看到细胞这样子就没有拍了，等过几天拍了在传