单细胞克隆、克隆形成实验、肿瘤球培养

细胞海洋

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YMM

回复 细胞海洋 的帖子1 K7 g) s7 D, O0 D. F

* W7 b1 J( Q% H/ M+ |好的，谢谢

86964109

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/ z' b7 M3 t! j+ M
sorry，好久没来了，才看见，不过我也不是专门做这个的，
) i- t4 I  n7 n# g一 Single-cell cloning self-renewal assay这个也不太了解，看看这几篇文献是否有用http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC319624/. r# l! F) W, j- g3 t
http://www.pnas.org/content/105/36/13427.full1 t6 H$ X; D4 y6 \
二 至于克隆形成实验网上成型的protocol应该有很多了，我们一般就这么做- H9 M) b/ O1 W5 Y8 o- ^
1细胞培养于含有10％胎牛血清的DMEM培养基中，在37 ℃、5％CO2、饱和湿度条件下的细胞培养箱中培养，细胞贴壁生长。实验均选用对数生长期细胞。  T# ^. ]. n  q+ _4 J
2细胞铺板：前一天将培养瓶中细胞用0.25%胰蛋白酶消化，接种100细胞至6孔培养板中，，在37 ℃、5％CO2、饱和湿度条件下的细胞培养箱中培养2-3周。
' a! l: S4 t; \/ E3当出现肉眼可见克隆时，终止培养，弃去培养基，甲醇固定，Giemsa染色试剂盒进行染色。0 o) H  [; w9 ]3 M; {
4弃固定液，滴入染色液I覆盖细胞表面，室温染色8 min，加入2倍体积染色液II，反应3 min，弃去染液，PBS清洗，镜下观察计数。（克隆形成率=克隆数/接种细胞数×100%）
6 k; @% {. r1 m3 Y大概就这样，很多文献中还会提到铺上琼脂什么的，

YMM

回复 86964109 的帖子. J- k1 V% z( i  m# |$ m
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嗯，好的，我再查查相关资料。非常感谢您的热情帮助

wenyoubiepa

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. T& L$ S0 `) a
* g  O9 i) g% b; w/ W受教了，我也想做肿瘤球培养实验，您传我一份详细的操作步骤吗？谢谢！

86964109

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. ~  }0 L6 q& S/ r$ v) ^4 C2 t5 }* g# A# I
不好意思，我也没养过，得到的信息都是来源于网络中大家分享的，http://www.dxy.cn/bbs/topic/16920599 ，1 a* V' s3 [; R2 ~' ~, E/ X
http://www.google.com.hk/search? ... 3%E5%9F%B9%E5%85%BB
8 O0 k" r2 o4 c+ Q" hhttp://www.csno.cn/pdf/2011/1/7.pdf
+ t0 p% K# r- i  E' `可以看下是否对你有帮助，还是建议直接google比较好