单细胞克隆、克隆形成实验、肿瘤球培养

细胞海洋

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YMM

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2 I; \! j  ?9 z) ?6 p- S
好的，谢谢

86964109

回复 YMM 的帖子0 R; L3 l! x- u2 q* L9 D- N( C6 Y4 H
$ r; T5 \( @7 J, B1 G
sorry，好久没来了，才看见，不过我也不是专门做这个的，" S% l) m5 c6 K+ B  W- b
一 Single-cell cloning self-renewal assay这个也不太了解，看看这几篇文献是否有用http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC319624// k  ?) h, d& L% I
http://www.pnas.org/content/105/36/13427.full
, `6 B) m% b* @8 `* d5 E- b: z二 至于克隆形成实验网上成型的protocol应该有很多了，我们一般就这么做6 u7 }5 w4 I; b6 M: U! g) n& p
1细胞培养于含有10％胎牛血清的DMEM培养基中，在37 ℃、5％CO2、饱和湿度条件下的细胞培养箱中培养，细胞贴壁生长。实验均选用对数生长期细胞。
# X( ?7 V9 {' I  q/ x! Z2 I2细胞铺板：前一天将培养瓶中细胞用0.25%胰蛋白酶消化，接种100细胞至6孔培养板中，，在37 ℃、5％CO2、饱和湿度条件下的细胞培养箱中培养2-3周。
% _7 p' w3 L/ {3当出现肉眼可见克隆时，终止培养，弃去培养基，甲醇固定，Giemsa染色试剂盒进行染色。1 d1 c/ W% P+ L2 l+ s
4弃固定液，滴入染色液I覆盖细胞表面，室温染色8 min，加入2倍体积染色液II，反应3 min，弃去染液，PBS清洗，镜下观察计数。（克隆形成率=克隆数/接种细胞数×100%）
" ?& d8 c2 b* {: ?% p+ v" Q大概就这样，很多文献中还会提到铺上琼脂什么的，

YMM

回复 86964109 的帖子0 \$ U  ~* _$ I! ?5 `) [: R) T8 \
& w2 k) _0 t% e/ u+ h
嗯，好的，我再查查相关资料。非常感谢您的热情帮助

wenyoubiepa

% D  ]8 F( S. k5 W% o% S

/ ~- X9 A& x7 m2 _& r; p  ]/ n8 l( ?* K回复 86964109 的帖子
* ?# a, ^! Z0 R% }# v, ?9 z  m" N# l6 e& P/ H  k
受教了，我也想做肿瘤球培养实验，您传我一份详细的操作步骤吗？谢谢！

86964109

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1 ?. u( n* N: v$ F
# `. `% F9 U* U8 w9 f7 d1 j! p* G; X不好意思，我也没养过，得到的信息都是来源于网络中大家分享的，http://www.dxy.cn/bbs/topic/16920599 ，
5 z1 D. R# M2 M/ c. [/ Khttp://www.google.com.hk/search? ... 3%E5%9F%B9%E5%85%BB+ C( X% M! }8 [6 w+ Y% o
http://www.csno.cn/pdf/2011/1/7.pdf' ^4 s1 x5 K3 f/ l6 C' [
可以看下是否对你有帮助，还是建议直接google比较好