求构建具有过表达基因+RNA干扰的慢病毒应用的文章

zhen022

问了一个生物公司，问是否可以构建一个可以同时表达某种蛋白质的基因和具有RNA干扰作用的小RNA，他们说不行。
" U# g* n$ E7 j' ~0 R- d刚了解这方面，不知道有没有这方面的报道？这种构建方式是理论上本身就不行还是因为构建很难啊？

michaelgibh

你的意思是把它们构建到同一个载体上吗，理论上可行，实际很难，它们的启动子不同。

zhen022

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* P6 g# R! G) d3 X! Q+ T
9 N  ~5 d  S3 J; w9 G) T" M, _8 u% C5 V嗯对啊，这种是不是启动子有各自的系统啊？那为何慢病毒上可以构建多个标记（这些不都是红色荧光蛋白，荧光素酶蛋白之类的啊）的基因呢

zhen022

ｕｐｕｐｕｐ

zhangweihwz

这是一个载体设计上的问题，完全是可以实现的。
& v. V: I2 n7 s1 F用于RNAi的载体上一般会带有筛选标记。将筛选标记换成自己需要表达的目的基因就行了。或者用IRES、2A将筛选标记和目的基因串联起来。同一载体上的H1 promoter 或者U6 promoter 后面仍旧可以插入shRNA。

zhen022

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' g: Z7 T6 i7 j! q/ q2 }( Y3 W+ I/ F
  Q* @9 {) l/ h9 d( V求相关技术文献之类的，因为问了公司，都说比较苦难达到两种基因的同时表达！

zhangweihwz

Cas9 载体不就是这样的吗。一个载体上需要表达较大的cas9蛋白，同时还需要表达gRNA。看看cas9的文章就会明白的。

goodboy

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% L6 A' p* \) v$ C/ x8 q2 P0 W& \% i2 X2 g0 W/ G/ x1 M9 S8 d
完全没有问题，我们实验室一直在用此系统。好多文章都有报道的。

zhen022

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& p) _8 ~: S: C5 a' |$ d! `5 c0 {& F# Q2 {0 B2 l$ }2 G$ b! ~# f
跪求几个相关文章，另外不知道你们做的效果基本如何。
6 o/ F; c2 U: ?) T  g- ?$ k" R2 m8 U我是真心没找到针对性的文献。

goodboy

回复 zhen022 的帖子& q" {" d9 g7 `+ Y9 S2 C2 l+ ?7 r

! H8 t  L  c  _" c; P在小鼠上可以成瘤