脐血分离的EPC的CD309表达量应该是多少？

coffee.cat105

          如题，现在在做脐血分离EPC，细胞形态看上去不错，铺路石样，增殖速度不错，3天长2倍没有问题，P1的血管形成情况也很不错，可是CD309的表达量一直就在10%以下，请问一下各位前辈这个脐血中分离的EPC的CD309流式表达应该是多少？会随着传代逐渐降低吗？我做了P1的，P3的，P4的，一直很低，但是看文献都在70%以上…………; M7 U5 e+ j. b% ~6 ]/ u. p) g

# {, K' E4 `* I+ ?# G        有没有EPC做流式的protocol，急需学习啊。
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pailishi

你用的是哪个的CD309?什么荧光的？是否在保质期内？我们做的脐血EPC养到P2一般确实在70%左右，甚至到90%
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: s, A. ^- B0 @' X有可能是抗体本身的问题，你可以换一个其它公司的抗体试试

pailishi

你用的是哪个的CD309?什么荧光的？是否在保质期内？我们做的脐血EPC养到P2一般确实在70%左右，甚至到90%
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0 h! f/ u9 j- V4 p1 e' x* @6 N有可能是抗体本身的问题，你可以换一个其它公司的抗体试试

coffee.cat105

pailishi 发表于 2013-11-12 09:05
+ B  M4 Y& G  d; d) O" k% ]你用的是哪个的CD309?什么荧光的？是否在保质期内？我们做的脐血EPC养到P2一般确实在70%左右，甚至到90%- V6 `" D) x) I8 M5 q7 x$ B, a
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抗体是BD的，接的PE，才买的，还不到半年…………没有确实的证据说是抗体的问题领导不会让换抗体的啊，
  X9 h- A) Y: T8 a0 J: q你们做的脐血也这么高吗？用的什么培养基，我用的EGM-2+10%FBS，消化是用Gbico的温和型的胰酶。

pailishi

BD公司，PE荧光，货号560872，培养基只用的EGM-2，脐血EPC

coffee.cat105

pailishi 发表于 2013-11-14 15:41 $ [* M# f) a# K1 y% L+ x
BD公司，PE荧光，货号560872，培养基只用的EGM-2，脐血EPC

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抗体是一样的，你培养基只用EGM-2的意思，是LONZA的EGM-2，含2%的血清的那个吗？

pailishi

是的

coffee.cat105

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又折磨了两个月，中间有一次上到60%，后面又做不出来了，问了好多人，都说一直很高，不能理解我这个是什么问题，怎么办啊