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小鼠间充干的一些细节问题 [复制链接]

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包包
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楼主
发表于 2010-4-26 12:24 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
1   消化的时候0.25%,8min是不是太长?但是小鼠的间充干贴壁很牢?过长消化的后果是什么?细胞活性下降?' i; F0 ^# |1 w" Q3 Z! K& V' z
2   培养期间,如更换其他的培养基,会不会影响其扩增?
6 g/ j) [% W" D3   DMEM-LG与α-MEM哪种比较适合小鼠?FCS的浓度选择10%或15%?
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优秀版主

沙发
发表于 2010-4-26 15:43 |只看该作者
1很长,贴壁过牢的细胞可能老化了,消化时间过长会使细胞活性下降
- Y6 E5 M- n) Y7 p' J* A2会
' Z+ v; }8 z$ t& p' c- g6 ~" U3α-MEM,15%FBS! M7 S2 U% d" P1 Y: |& K- ^9 @
以上只是个人经验,仅供参考
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藤椅
发表于 2010-4-26 19:17 |只看该作者
1.一般外文文献上都有建议用酶消化时间不要超过5分钟,如果是不容易洗脱下来的贴壁细胞可以放入37度恒温箱,用枪头移液轻轻吹打。
" w! p  F+ t0 ?2.MSC具有较强的环境敏感性,除非你换的培养基非常之好,否则一般不建议- l5 B4 s) I. r/ A" r5 l" x, D
3.LG-DMEM的用的比较多,至于FBS的浓度,可以在实验中自己摸索,一般原代培养用的FBS浓度要稍稍高一些,但是在传代后,会降至10%。
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板凳
发表于 2010-4-26 19:50 |只看该作者
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1.消化时间太久还没下来的不一定是MSC,给你一篇09年nature protocols上一篇文章看看,这种方法原代帖壁细胞只消化2min--,你还可以找其原论著看看,我就不发了。
" n0 p+ V8 A* c, j. A2.培养基还是不要随便换为好
; i  }% Y; w* H1 o+ ?% K+ i5 ]3.DMEM和α-MEM都有人用,FBS10%和15%也都有人用。但是有报道说15%更容易促其自发分化。还是10%的DMEM见的比较多吧,我用的是这个方案。
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报纸
发表于 2010-4-27 11:09 |只看该作者
谢谢大家的宝贵意见。收益多多。再次谢谢。

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地板
发表于 2010-8-9 00:29 |只看该作者
我也有些想请教的 例如小鼠品种性别年龄的选择 原代接种的密度(25cm2的瓶子应该接种多少细胞?) 首次换液和传代的时间大概是多久,到底差速贴壁和差速消化具体的是怎样?MSC的特性是易消化和易贴壁吗?传代接种的密度应该多大 有事一味的1传2 结果细胞少的可怜 又要2:1来接种 很郁闷啊 望高手们指教
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