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可以的呀 国内外都已经有相关的临床研究。# d6 L9 T6 x7 r) u$ J- _7 o
今年10月份中山大学附属三院的高志良教授和他们的研究小组在HEPATOLOGY上发表了一篇文献《自体骨髓间充质干细胞移植治疗乙肝所致肝衰竭的短期及长期疗效》。我们论坛上之前也有过他们研究的分享,感觉高教授他们做得非常棒,再次跟大家分享一下~! B9 ? n( x# m
骨髓间充质干细胞作为治疗细胞,其具有以下优点而广泛用于细胞治疗:易于分离和培养;较强的增殖分化能力;独特的免疫调节作用及移植后副作用较低。自体骨髓干细胞移植时,因骨髓间充质干细胞取自患者自体,故避免了免疫排斥的可能。1 ~$ x: m# c' e: W# s
高教授的研究方法(翻译自上诉文献,希望能对你有所启发):
1 r& s+ W' h3 ?: P" Q研究人群 2005年九月份至2009年六月在我科就诊的527名乙肝所致肝衰竭病人均接受药物治疗,主要为保肝、降酶、退黄及白蛋白支持等对症治疗,药物治疗一周作为研究起点。
- o7 E' i. ^+ O6 q入组标准 1、年龄在15-75岁之间;2.签署自体骨髓间充质干细胞移植知情同意书,并自愿接受干细胞移植治疗;3、诊断为乙肝所致的肝衰竭。诊断标准:乙肝诊断标准为美国肝脏疾病协会2009年制定的慢乙肝防治指南(发表于hepatology);肝衰竭诊断标准为亚洲及大洋洲肝病协会2009年一致通过的肝衰竭诊治指南。
0 H z) G' E5 P! q: ]. S 排除标准:1、孕妇及哺乳期的女性患者;2、术前6个月内接受了抗病毒治疗或免疫调节治疗;3、存在其他可以引起活动性肝病的因素(如自身免疫性肝病、药物性肝损害、酒精性肝病及遗传代谢性肝病等);4、伴有HIV感染或先天性免疫缺陷性疾病;5、有肝癌或其他恶性疾病;6、严重的糖尿病;7、自身免疫性疾病;8、其他重要脏器衰竭(如肾衰竭);8、伴有感染症状(如出现发热、白细胞或淋巴细胞增多、有腹部、胆道或肺部感染);9、有其他严重的并发症(如肝性脑病、消化道出血等);10、不能耐受上述药物治疗;11、已经接受或即将接受人工肝或肝移植治疗的患者。3 I- E+ Y/ {+ @: Z, S
分组及亚组 评估病情后,向患者介绍干细胞移植的可行性及风险,共有53名患者签署知情同意,并进行骨髓干细胞移植,即为移植组 A组;与其年龄、性别、肝功能指标及MELD评分具有可比性的有105人。设为对照组,B组。. E' y1 g2 c0 C6 D
每组人群再根据是否伴有肝硬化分为两个亚组,即A1组、A2组;B1组、B2组。% b7 v) t" t) n6 Z5 O
方法 1、骨髓间充质干细胞的采集、分离* ]6 m: N! m w5 ?; g# k$ l
移植组患者在接受1周的药物治疗后,在严格无菌的条件下,以髂前上棘为穿刺点,抽取骨髓100-120ml;在无菌的细胞培养室中利用密度梯度离心法进行分离,用生理盐水稀释骨髓后,缓慢加入等量的percol分离培养基,在离心机中以2500转/分的转速离心30分钟。分离得到单个核细胞,并用10ml生理盐水冲洗3次。收集细胞悬液并保存在10ml生理盐水中,其中0.2ml接种在含有10%胎牛血清的L-DMEM培养基中。从100-120ml骨髓中分离出的单个核细胞的数目为3.4+—3.8×10的八次方。
5 a2 I& f! I- K 2、骨髓间充质干细胞的培养及流式细胞学检验其表型
- f* [+ o: s& h+ }: i* K! K将0.2ml的细胞悬液在37摄氏度的环境中置于25平方厘米的培养基中进行培养,三天后进行换液,以后每两天换液一次。当有70-80%的细胞融合后,用0.25%的胰酶和0.1%的EDTA液消化骨髓间充质干细胞,并以1:2进行传代。将第三代细胞进行消化后,并用PBS液冲洗,并以1.0*10的六次方的密度生长。' g- d- a4 c7 h
用流式细胞学方法检测其表型。3 L6 X& p' v/ V* ~
4 Q9 r! ]. _5 y2 r% m) A+ r: t 3、自体骨髓间充质干细胞移植
9 }( z: \7 e$ ^. M1 l干细胞移植通过介入的方法在手术室中进行,在心电监护下,穿刺股动脉、穿刺管并通过腹主动脉、腹腔干及肝总动脉,最后将管子置于肝固有动脉。在20-30分钟内将干细胞悬液(存放于10ml生理盐水中)缓慢输注至肝脏。
' H* x" W7 I) d8 f: t 4、观察指标及随访
4 {9 W- x/ M( r s, _移植组和对照组的平均住院日分别为 29.27 +—31.34 和30.68 +—35.29 天,将住院期间定义为短期,即1-4周,4-192周为长期。 # F/ c, n' O+ ?3 D! x/ n2 T$ D
在移植后1-4周,每周进行一次随访;移植4-192周,每12周随访一次;
; v. J0 z8 x$ ?/ \& g8 o观察指标主要有:1、观察并记录移植后的成功率、副反应及并发症;2、在短期内观察临床症状,如食欲减退、腹胀、疲劳;3、肝功能指标:ALT、白蛋白、总胆红素、凝血时间及MELD评分;4、肝细胞癌发生率及死亡率。 |
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